[发明专利]一种基于人TLR4基因启动子区的双荧光素酶报告基因载体及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 201910609301.7 | 申请日： | 2019-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN110305901A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 郑冰蓉;陈国栋;焦扬;张红平;杨璐涵 | 申请（专利权）人： | 云南大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/52;C12N15/66;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 罗东 |
| 地址： | 650091*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于人TLR4基因启动子区的双荧光素酶报告基因载体及其构建方法与应用，属于分子遗传学领域。本发明通过设计5'末端包含接口上下游序列同源臂的引物TPprimer1和TPprimer2，扩增得到TLR4基因的‑3494至+235序列，将其通过Gibson组装的方法无缝克隆至双荧光素酶报告载体pGL3‑basic的NcoI位点构建人源TLR4基因5'端启动子区双荧光素酶报告基因载体pGLTlr4/‑3494+235。本发明双荧光素酶报告基因载体可通过BglII、KpnI和EcoRI等限制性内切酶消化后重新连接而构建包含不同长度启动子的衍生型报告基因载体，进而用于在不同组织来源的细胞中分析TLR4基因的启动子序列，探讨TLR4基因启动子细胞特异性调控机制等。 | ||
| 搜索关键词： | 双荧光素酶报告基因 构建 基因启动子区 基因 分子遗传学领域 报告基因载体 限制性内切酶 荧光素酶报告 基因启动子 启动子序列 细胞特异性 调控机制 启动子区 重新连接 启动子 同源臂 衍生型 扩增 人源 位点 引物 应用 克隆 组装 细胞 消化 分析 | ||
【主权项】：
1.一种基于人TLR4基因启动子区的双荧光素酶报告基因载体，其特征在于：双荧光素酶报告基因载体为pGLTlr4/‑3494+235，载体的DNA序列如SEQ ID NO.5所示。
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