[发明专利]应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK-7的方法

摘要

本发明公开了应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK‑7的方法，属于遗传工程领域。本发明通过对磷酸激酶KinA截短突变，并用组成型启动子Pveg表达，使细胞能够在培养基营养丰富的情况下产生芽孢信号。应用本发明方法得到受Phr60‑Rap60群体响应调控的Spo0A系统，通过对MK‑7合成途径的动态调控，实现了MK‑7的高效合成，不需要额外诱导剂，实现了目标产物高效合成与细胞生长之间的动态平衡。最终得到的枯草芽孢杆菌重组菌BS19、BS20摇瓶发酵生产MK‑7的产量分别高达170mg/L、360mg/L，是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168的17.89、37.89倍。

主权项

1.一种应用枯草芽孢杆菌群体响应调控系统合成MK‑7的方法，其特征在于，在枯草芽孢杆菌的染色体上进行了如下改造：(1)将组氨酸激酶KinA的基因进行截短突变并且进行了组成型表达，同时敲除组氨酸激酶KinB的基因；(2)将含有P_hag启动子的Rap60基因整合到染色体上，并在染色体上Rap60基因下游整合两个拷贝的信号分子Phr60的表达框；(3)使用P_abrB(cs‑1)启动子替换丙酮酸激酶基因和十一碳烯基焦磷酸合成酶基因的启动子；所述P_abrB(cs‑1)启动子的序列如SEQ ID NO.14所示。