[发明专利]一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法及其应用在审
| 申请号： | 201910453104.0 | 申请日： | 2019-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN110106196A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 姚凯;覃欢;张士尧;冯源;张文良;姚浩哲;肖鹦;王佳汝;吴嘉轩 | 申请（专利权）人： | 武汉科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63 |
| 代理公司： | 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) 42247 | 代理人： | 陈凯 |
| 地址： | 430000 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法及其应用。本发明提供的构建长片段目的基因的方法能够有效降低目的基因构建时的经济成本，同时，降低碱基突变的概率。其技术要点包括：将目的基因序列根据实际需要分段，并分别在每段的两端加入酶切位点序列，然后合成相应目标产物序列片段；利用T4多聚核苷酸激酶的寡核苷酸5’末端将目标产物磷酸化；将磷酸化的目标产物退火，得到目的片段；将载体质粒酶切，所形成的粘性末端与第一步中所加入的酶切位点序列对应，并回收酶切产物，得到载体片段；将目的片段与载体片段连接，得到连接产物。 | ||
| 搜索关键词： | 目的基因 多聚核苷酸 目标产物 长片段 酶切位点序列 激酶构建 目的片段 载体片段 磷酸化 构建 分子生物学技术 退火 寡核苷酸 技术要点 碱基突变 经济成本 连接产物 酶切产物 序列片段 载体质粒 粘性末端 激酶 酶切 分段 应用 合成 回收 概率 | ||
【主权项】：
1.一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将目的基因序列根据实际需要分段，并分别在每段的两端加入酶切位点序列，然后合成相应目标产物序列片段；S2：利用T4多聚核苷酸激酶的寡核苷酸5’末端将目标产物磷酸化；S3：将磷酸化的目标产物退火，得到目的片段；S4：将载体质粒酶切，所形成的粘性末端与步骤S1中所加入的酶切位点序列对应，并回收酶切产物，得到载体片段；S5：将目的片段与载体片段连接，得到连接产物。
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