[发明专利]一种氧化石墨烯亲和固定化载体及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种氧化石墨烯亲和固定化载体及其制备方法与应用，该亲和载体的制备包括氧化石墨烯的羧化、氧化石墨烯羧基的活化、聚乙二醇氨的修饰、螯合配基的修饰以及Ni2+的螯合。通过本发明得到的亲和载体可以有效的解决其它亲和载体如氧化石墨烯直接修饰Ni2+以及氧化石墨烯先修饰螯合配基再修饰Ni2+造成的固定化酶失活问题。通过本发明得到的固定化酶具有酶活高、酶活损失少等优势。

主权项

1.一种氧化石墨烯亲和固定化载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)氧化石墨烯的羧化：将氧化石墨烯超声分散于N,N‑二甲基甲酰胺中，制成浓度为0.5～5mg/mL的氧化石墨烯悬浊液，然后加入马来酸酐混合均匀，将混合物于70～90℃下反应1～3h，经离心，洗涤，冻干，即得羧化的氧化石墨烯；(2)氧化石墨烯的表面活化：将步骤(1)羧化的氧化石墨烯按照浓度0.5～1mg/mL超声分散于纯水中，加入2‑(N‑吗啉代)乙磺酸缓冲液制成浓度为0.125～0.25mg/mL的羧化的氧化石墨烯悬浊液，然后依次加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐活化反应15～30min，再加入N‑羟基琥珀酰亚胺活化反应1～3h，活化时的反应温度为4～25℃；经离心，洗涤，重悬，制成浓度为0.5～1mg/mL表面活化的氧化石墨烯悬浊液；(3)氧化石墨烯表面的氨基修饰：在步骤(2)浓度为0.5～1mg/mL表面活化的氧化石墨烯悬浊液中加入聚乙二醇氨，控制pH在7.0～7.5之间，在25～30℃下反应6～12h，经离心，洗涤，重悬，制成浓度为0.5～1mg/mL表面氨基修饰的氧化石墨烯悬浊液；(4)氧化石墨烯表面的亲和离子修饰：在步骤(3)浓度为0.5～1mg/mL表面氨基修饰的氧化石墨烯悬浊液中加入1～4wt％的戊二醛水溶液，控制pH在7.8～8.2之间，在25～30℃下反应2～5h，离心，洗涤，重悬，得到浓度为0.5～1mg/mL的表面氨基活化的氧化石墨烯悬浊液；向上述浓度为0.5～1mg/mL的表面氨基活化的氧化石墨烯悬浊液中加入金属离子螯合剂，控制pH在7.8～8.2之间，在25～30℃下反应6～12h，离心，洗涤，重悬，得到浓度为0.5～1mg/mL表面修饰螯合配基的氧化石墨烯悬浊液；再向上述浓度为0.5～1mg/mL表面修饰螯合配基的氧化石墨烯悬浊液中加入NiCl₂`6H₂O溶液，控制pH在7.8～8.2之间，在25～30℃下反应2～4h，经离心，洗涤后，即得。