[发明专利]一种CAR-T毒性指示细胞的快速构建方法有效

专利信息
申请号: 201910371661.8 申请日: 2019-05-06
公开(公告)号: CN110129370B 公开(公告)日: 2021-07-20
发明(设计)人: 唐东起;张文 申请(专利权)人: 山东昂科诺生物科技有限公司
主分类号: C12N15/867 分类号: C12N15/867;C12N15/62
代理公司: 山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司 37108 代理人: 张娟
地址: 250000 山东省济南市高新*** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明公开了一种CAR‑T毒性指示细胞的快速构建方法,包括以下步骤:首先,构建序列为SEQ NO:1的慢病毒质粒;其次,慢病毒质粒大提,病毒包装制备得到慢病毒;再次,慢病毒感染常用细胞X;最后,将一种或几种生物素化处理的蛋白A加入到通用细胞U中,与U细胞膜上的avidin紧密结合,得到CAR‑T毒性指示细胞;本发明的CAR‑T毒性指示细胞的快速构建方法,通过添加不同的生物素化处理的蛋白A或其组合,能够快速的将含有Luciferase基因片段的细胞U转变为多种适用于CAR‑T毒性检测的指示细胞,大大省略了繁琐的制备步骤,节省了制备时间,降低了成本。
搜索关键词: 一种 car 毒性 指示 细胞 快速 构建 方法
【主权项】:
1.一种CAR‑T毒性指示细胞的快速构建方法,其特征在于:包括以下步骤:①构建序列为SEQ NO:1的慢病毒质粒,该慢病毒质粒携带以下外源基因片段:IgK leader、avidin、CD28跨膜区、T2A序列及Luciferase;②慢病毒质粒大提,病毒包装制备得到慢病毒;③慢病毒感染常用细胞X,通过嘌呤霉素筛选获取稳定表达荧光素酶Luciferase和抗生物素蛋白avidin的通用细胞U;其中常用细胞X为工具细胞、悬浮细胞或贴壁肿瘤细胞;所述工具细胞为293FT细胞或Jurkat细胞;所述悬浮细胞为U266细胞、RPMI8226细胞、Raji细胞或K562细胞;贴壁肿瘤细胞为MCF‑7细胞或MDA‑MB‑231细胞;④将一种或几种生物素化处理的蛋白A加入到通用细胞U中,与U细胞膜上的avidin紧密结合,得到CAR‑T毒性指示细胞;生物素化处理的蛋白A为以下细胞的细胞膜靶抗原胞外域部分:CD19、CD20、CD38、CS1、CD30、PDL1、GPC3或Her2肿瘤细胞。
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