[发明专利]一种中国被毛孢人工培养物的制备方法

摘要

本发明涉及一种中国被毛孢人工培养物的制备方法。通过在冬虫夏草菌（中国被毛孢）的不同培养阶段添加代谢调节剂，干预中国被毛孢的代谢，特别是干预常规培养物与野生冬虫夏草代谢差异物的代谢通路，使人工培养的中国被毛孢菌的代谢物更接近野生冬虫夏草。调节结果显示，代谢调节后的中国被毛孢菌丝代谢物与野生冬虫夏草代谢物聚类在一起，同时其指纹图谱基本一致，表明经过本发明代谢调节的中国被毛孢人工培养物可代替野生冬虫夏草。本发明的中国被毛孢菌丝产品是由室内发酵生产，可工厂化全年生产，不受野生冬虫夏草的高原低温等恶劣环境影响，不破坏生态环境，具有广阔的市场。

主权项

1.一种成分与天然冬虫夏草一致的中国被毛孢人工培养物的制备方法，其特征在于操作步骤如下：（1）制备一级固体菌种将分离纯化的中国被毛孢（Hirsutella sinensis）斜面菌种接种于平板固体培养基中，每支斜面菌种接2个9cm平板；然后于温度17～20℃，培养20～30天，得到一级固体菌种；所述固体培养基为马铃薯培养基；（2）制备二级液体菌种 将一级固体菌种接种于液体培养基中，每个9cm平板菌种接200mL液体培养基；接种后于温度17～20℃、转速180转/分钟、振荡培养10～20天，得到二级液体菌种；（3）制备三级发酵物将二级液体菌种按5～10%体积比接入发酵罐中，发酵罐的发酵培养基装液量50～70%，通气量按体积比1:1（v/v），压力0.1MP，温度17～20℃条件下，培养5～15天后加入100～500mg/L一号代谢调节剂和50～250mg/L二号代谢调节剂；培养10～20天后加入10～50mg/L三号代谢调节剂；继续培养20～40天，得到三级发酵物；所述一号调节剂为硫酸锌或氯化锌；所述二号调节剂为亚油酰甘油磷酸乙醇胺或亚油酰丝氨酸磷酸酯；所述三号调节剂为植物鞘胺醇或1‑磷酸鞘胺醇；（4）中国被毛孢人工培养物制备将三级发酵物离心分离、过滤滤出菌丝，温度100℃以下干燥，粉碎，即得中国被毛孢人工培养物，中国被毛孢人工培养物为灰白色粉末, 中国被毛孢人工培养物的成分与天然冬虫夏草的成份一致，其中甘露醇含量大于3.5%、腺苷含量大于0.04%、甾醇含量大于0.3%。