[发明专利]一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法

摘要

本发明提供了一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法，本神经元培养方法操作方法简单，具有较高的可重复性；通过使用专用背根神经节细胞培养基，背根神经节细胞生产效果好，保证了背根神经节细胞的纯度。本发明能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的SD大鼠背根神经节细胞，便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究背根神经节细胞的生理功能。

主权项

1.一种SD大鼠背根神经节细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：DMEM/F12完全培养基配制：超净工作台内取88ml DMEM/F12基础培养基于无菌、干净的瓶内，加入10ml FBS、1ml青链霉素双抗、1ml谷氨酰胺，0.22um过滤器过滤后转移至新的瓶内，盖紧瓶盖；瓶子上标明培养基名称、配制日期、配制人后缠紧封口膜，4度冰箱保存备用；背根神经节细胞培养：步骤A：无菌条件下仰卧放置新生SD大鼠于解剖液中，断头后打开胸腹腔，除去内脏器官；步骤B：从颈部椎管开口插入显微剪，沿脊柱背侧中线两侧剪开椎管，去除暴露脊髓后，即在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧排列的背根神经节，用精细显微摄小心挑取，并剥除其被膜；步骤C：将步骤B中剥离好的背根神经节转移至15ml离心管内，加入1ml0.25%胰蛋白酶37度消化15min，直至组织块呈絮状缠绕时立刻加入2ml DMEM/F12完全培养基终止消化；移液器吹打20次至无明显组织块为止；步骤D：接种细胞至六孔板内，每孔接种10⁵个细胞，37℃、5%二氧化碳培养箱内培养；培养24h后细胞开始贴壁并长出形态，3d时细胞形态完全长开，培养至7d时培养完成；培养时第一天使用DMEM/F12完全培养基，第二天起更换Neurobasal A完全培养基。