[发明专利]一种皮肤组织来源成纤维细胞快速分离培养方法

摘要

本发明提供了一种皮肤组织来源成纤维细胞快速分离培养方法。该方法采用少量多次加液方式，使小组织块也能达到优良的贴壁效果；使用自主研发的成纤维细胞选择性培养基，使成纤维原代细胞快速爬出生长，纯度在95％以上；发明人还提供了一种纯化成纤维细胞的培养方法，可以将成纤维细胞纯度提高到99％。本发明提供的方法可大大减小皮肤组织块提供者创伤面积，有效缩短成纤维原代细胞培养时间，对组织块伤害小，可以稳定进行多次成纤维细胞原代培养，操作简便。本发明不仅适用于人和小鼠等皮肤组织块成纤维原代细胞培养，也适用于脐带来源、胎盘来源干细胞、癌旁组织等原代细胞培养，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种皮肤组织来源成纤维细胞快速分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：用活检取样器、手术刀或其他工具择一取皮肤组织块，将取下的皮肤组织块浸泡于组织块保存液(或含双抗的PBS、生理盐水)中；步骤(2)：将皮肤组织块转移至含双抗的PBS(或生理盐水)中洗涤5～8遍；步骤(3)：修剪皮肤组织并去除皮下组织、脂肪，把皮肤组织剪切成小块；步骤(4)：将皮肤组织块转移至培养皿里，加一滴选择性培养基润湿组织块，放置37℃，5％CO2培养箱静置1～2h；步骤(5)：将装有皮肤组织块的培养皿取出，补加选择性培养基至没过组织块，放置37℃，5％CO2培养箱培养；步骤(6)：三天更换一次新鲜选择性培养基，继续培养，直至获得皮肤成纤维原代细胞；步骤(7)：获得皮肤成纤维原代细胞后，更换含营养物质比例更高的选择性培养基继续培养，细胞汇合度达80％～90％时，即进行消化传代。