[发明专利]一种人脐带华通氏胶组织工程支架的制备方法

摘要

本发明公开了一种人脐带华通氏胶组织工程支架的制备方法，具体包括以下步骤：S1、华通氏胶分离；将新鲜脐带去除血管，然后进行剪碎，S2、机械粉碎：将S1剪碎的华通氏胶加入生理盐水，然后摇匀成浆，涉及生物医学技术领域。该人脐带华通氏胶组织工程支架的制备方法，可实现通过采用去细胞、冻干及交联的方法，制备出去细胞人脐带华通胶组织工程用支架，制备的组织工程支架保留了华通氏胶中糖胺多糖和II型胶原等成分，接种于支架上的细胞黏附于支架孔壁上，生长状态良好，分泌基质，体试验无免疫反应，产品具有很好的应用前景，从而大大提高了支架的力学性能，很好的消除了抗原性，达到了降解速率可控的目的。

主权项

1.一种人脐带华通氏胶组织工程支架的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、华通氏胶分离；将新鲜脐带去除血管，然后进行剪碎；S2、机械粉碎：将S1剪碎的华通氏胶加入生理盐水，然后摇匀成浆；S3、反复冻融：将S2匀浆液分装冻存管液氮冻存23‑25小时，37摄氏度复温1‑1.5小时，重复3次；S4、差速离心：将S3冻融好的匀浆液1800g离心15‑22分钟，保留上清液，加入0.8‑1％Tritin X‑100、0.2‑0.25％胰酶、Tris‑HCl缓冲液，在3‑5摄氏度搅拌23‑25小时，2500g离心25‑33分钟，收集上清，加入DNase和RNase，并在37摄氏度消化15‑18小时，4摄氏度3800g离心15‑22分钟，调节PH至7.0，取上层匀浆4摄氏度10000g离心35‑45分钟，收集沉淀；S5、化学交联：将S4收集到的沉淀调整为3％(W/V)混悬液，充分搅拌均匀，注入聚乙烯模具中，在零下20摄氏度预冻25‑35min，放入冷冻干燥机中进行冻干，48h后形成三维多孔海绵支架，然后将支架置于258nm波长紫外线照射下交联6‑10h，再于含20mmol/L N‑羟基琥珀酰亚胺和50mmol/L乙基‑二甲基胺‑丙基碳化二亚胺的95％(V/V)乙醇溶液中，在4摄氏度下交联23‑25h，之后在无菌PBS漂洗浸泡1‑2h，三蒸水漂洗去除残余交剂，再次冻干，然后密封袋保存，并进行60Co照射消毒，最后在4摄氏度条件下保存备用；S6、工程支架的制备：将S5得到的华通氏胶组织接种于支架上，使细胞黏附于支架孔壁上，并使细胞正常生长，然后分泌基质，进行免疫试验。