[发明专利]一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201811442625.8 | 申请日： | 2018-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN109402134A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 王库强;王峰 | 申请（专利权）人： | 湖南百尔泰克生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/18 | 分类号： | C12N15/18;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/61;C12R1/19 |
| 代理公司： | 长沙永星专利商标事务所(普通合伙) 43001 | 代理人： | 周咏;林毓俊 |
| 地址： | 414600 湖南省岳阳*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法，包括以下步骤：1)通过PCR法对人生长激素hGH基因进行扩增，得到扩增后的hGH基因；2)将步骤1)中的扩增后的hGH基因连接到pMal‑p2x载体上，得到重组质粒pMal‑hGH；4)将步骤3)中的重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)中，通过IPTG诱导蛋白表达，并确定表达正确后，获得高效表达生长激素的工程菌。本发明分别采用pMal‑p2x作为载体，获得了重组质粒pMal‑p2x‑GH，pMal‑p2x‑GH的重组质粒的氨基端带有一个MBP蛋白标签，因而将重组质粒导入到大肠杆菌的受体中，可以将hGH和MBP标签进行融合表达，从而将hGH带到外周质空间，更有利于hGH蛋白的纯化，而且由于外周质的氧化环境，hGH蛋白能够正确形成二硫键，使蛋白具有较好的活性。 | ||
| 搜索关键词： | 重组质粒 生长激素 高效表达 工程菌 扩增 大肠杆菌 蛋白 外周 制备 人生长激素 蛋白标签 蛋白表达 基因连接 融合表达 氧化环境 氨基端 二硫键 基因 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法，包括以下步骤：1)通过PCR法对人生长激素hGH基因进行扩增，得到扩增后的hGH基因；2)将步骤1)中的扩增后的hGH基因连接到pMal‑p2x载体上，得到重组质粒pMal‑hGH；3)将步骤2)中的重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)中，通过IPTG诱导蛋白表达，并确定表达正确后，获得高效表达生长激素的工程菌。
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