[发明专利]一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法在审
| 申请号： | 201811334805.4 | 申请日： | 2018-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN109294978A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 周光斌;潘波;张月;李伟;杨昊轩 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 苗艳荣 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法，通过将卵母细胞在含有褪黑素的冷冻液中冷冻，后经含有褪黑素的蔗糖溶液解冻后培养，再经卵母细胞孤雌激活，最后进行孤雌激活胚胎体外培养完成。本发明方法工艺简单、耗时短，且能有效提高玻璃化冷冻后成熟卵母细胞孤雌激活发育潜力。 | ||
| 搜索关键词： | 成熟卵母细胞 玻璃化冷冻 孤雌激活 卵母细胞 发育 黑素 孤雌激活胚胎 体外培养 蔗糖溶液 冷冻液 解冻 冷冻 耗时 | ||
【主权项】：
1.一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)卵母细胞收集：采集7‑8周龄雌性小鼠输卵管，脱去颗粒细胞，洗涤后待用；2)卵母细胞玻璃化冷冻：卵母细胞在预处理液中处理30秒，然后转移至冷冻液中处理25秒，迅速将装载有卵母细胞的开放式拉长塑料细管(Open Pulled Straw,OPS)投入到液氮；3)卵母细胞解冻：OPS管从液氮中取出，立即浸入37.5℃恒温的蔗糖溶液中，然后将卵母细胞吹出至蔗糖溶液大液滴中，洗涤后转移至蔗糖溶液小液滴中，此过程共计5分钟。然后转移至预先在培养箱中孵育约8小时的M2中，置于培养箱中培养1小时；4)卵母细胞孤雌激活：体外培养1小时后，成熟卵母细胞在孤雌激活A液中洗涤3次，后转入另一A液中，并在培养箱中培养2.5小时，然后将细胞转至孤雌激活B液中，洗涤3次后置入另一B液中，于培养箱中培养3.5小时；5)孤雌激活胚胎体外培养：将孤雌激活后的卵母细胞转入胚胎培养液中培养。
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