[发明专利]一种降低畜禽粪便堆肥氨挥发的高温微好氧堆肥保氮菌的复壮方法

摘要

本发明属于环境微生物技术领域，涉及到菌株的复壮，特别涉及到一种降低畜禽粪便堆肥氨挥发的高温微好氧堆肥保氮菌的复壮方法。采用堆肥样品作为培养基质进行驯化培养，经过多次平皿涂布、平皿划线传代培养以及氨氧化能力检测，最终得出最适合此株氨氧化细菌恢复氨氧化能力的复壮条件。用此方法复壮后的降低畜禽粪便堆肥氨挥发的高温微好氧堆肥保氮菌氨氧化活性可恢复至退化前正常水平。

主权项

1.一种降低畜禽粪便堆肥氨挥发的高温微好氧堆肥保氮菌的复壮方法，其特征在于：步骤为：(1)将需要复壮的降低畜禽粪便堆肥氨挥发的高温微好氧堆肥保氮菌进行驯化培养：将需要复壮的降低畜禽粪便堆肥氨挥发的高温微好氧堆肥保氮菌接种于氨氧化细菌种子培养基，，培养得到种子液，种子液接入复壮驯化培养基中，培养后，取上清菌液接入氨氧化细菌检测培养基，培养得到的复壮培养菌液，利用格里斯试剂显色法进行氨氧化能力检测；(2)对驯化培养后的细菌进行分离纯化(a)平皿涂布培养取氨氧化能力显色试验结果呈玫红色和淡粉色的复壮培养菌液，进行平皿涂布培养，平皿涂布培养基为氨氧化细菌固体培养基；(b)平皿划线培养选取步骤(a)所得平皿涂布培养中菌落长势良好的平皿，挑取独立菌落在氨氧化细菌固体培养基上进行平皿划线培养；(c)单菌落检测挑选出平皿划线培养中长势良好的平皿，挑取独立菌落接入氨氧化细菌种子培养基，培养得种子液，种子液接种至氨氧化细菌检测培养基，培养后，利用格里斯试剂显色法进行单菌落氨氧化能力显色检测；(3)对有效菌种进行筛选检测：取单菌落氨氧化能力显色检测结果呈玫红色的即氨氧化能力强的菌落，将其在步骤(2)(c)得到的种子液接种至氨氧化细菌种子培养基，培养后得到培养液，接种至氨氧化细菌检测培养基，培养，测定亚硝酸盐含量，氨氧化活性为34.0mg/L到36.0mg/L之间的菌株为复壮有效菌株。