[发明专利]一种测定小分子生物标志物的方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种测定小分子生物标志物的方法。具体而言，该方法包括：1)样品预处理；2)色谱分离；3)质谱检测；和4)计算。本发明中的方法具有样品前处理步骤简便、分析速度快、专属性好、精密度及准确度高等优点，不仅适用于血清样本，而且适用于干血片样本，便于采样，易于运输和保存，采血者顺应性好。另外，在样品前处理步骤中，还原剂的引入使得样品中的结合态同型半胱氨酸及同型半胱氨酸二聚体能够解离为游离态单体，更准确地测定样品中同型半胱氨酸含量。

主权项

1.一种测定小分子生物标志物的方法，其包括下列步骤：1)样品预处理：取包含小分子生物标志物的生物样品，加入内标、提取溶剂以及还原剂，混匀，去除蛋白质，得到待测样品；2)色谱：对步骤1)中得到的待测样品进行液相色谱分离，色谱条件如下：色谱柱：HILIC色谱柱；流动相：二元流动相，流动相A为水，水中含有5～15mmol/L的甲酸铵或乙酸铵，流动相B为乙腈；流速：0.2～0.5mL/min；进样量：5～10μL；柱温：30～40℃；3)质谱：对步骤2)中分离得到的组分进行质谱检测，质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源；离子源温度：200～700℃；离子源电压：4500～5500V；碰撞气压：4～6psi；气帘气压：25～35psi；雾化气压：45～55psi；辅助气压：45～55psi；检测方式：正离子检测；扫描模式：多重反应监测模式；4)计算：采用标准曲线法，分别将存在对应关系的小分子生物标志物和内标的色谱峰面积的比值代入相应的标准曲线方程，再分别将无对应内标的小分子生物标志物的色谱峰面积代入相应的标准曲线方程，计算得出小分子生物标志物在生物样品中的浓度。