[发明专利]基于CRISPR-Cas的等温核酸检测方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201811001245.0 | 申请日： | 2018-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN109055499B | 公开（公告）日： | 2021-01-19 |
| 发明（设计）人： | 韩序;高晓庆;马秀玲;施慧玲;段昆;欧阳川 | 申请（专利权）人： | 杭州杰毅生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310031 浙江省杭州市西湖区三墩镇*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas的常温等温快速检测核糖核酸的技术及检测方法。本发明旨在生物体外利用公开的多种基因工程酶与化学组分进行核糖核酸扩增，并通过一种或多种核酸酶，在常温等温条件下实现快速、一步或两步的完成特定核糖核酸(RNA)或脱氧核糖核酸(DNA)的扩增与检测过程，使对各种核酸的检测更快速和更简便。包括以下步骤:(1)通过核酸提取得到待检测样本的RNA或单链DNA或双链DNA；(2)利用逆转录酶、转录酶、核糖核酸酶H、CRISPR相关蛋白13的组合酶以及核酸荧光探针与待检核酸在等温进行反应，若待检测核酸为DNA，在反应前增加预变性的步骤；(3)通过检测荧光信号，判断待检测样本中是否存在目标核酸。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas 等温 核酸 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.基于CRISPR‑Cas的等温核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从待检测样本中提取总核酸；(2)将提取后的待检核酸样本加入含有酶混合液、向导DNA、RNA荧光探针和扩增引物对的缓冲液中进行等温反应；所述酶混合液包括CRISPR‑Cas核酸酶、RNA聚合酶、逆转录酶、核糖核酸酶H和RNA酶抑制蛋白；(3)利用酶标仪检测反应后的荧光信号，通过荧光信号来判断待检样本中是否存在目标核酸序列。
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