[发明专利]一种重组载体CAR-CD244-antiCD19的制备方法有效
| 申请号： | 201810984136.9 | 申请日： | 2017-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN109097402B | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 顾雨春;尹乐 | 申请（专利权）人： | 国健呈诺生物科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京卫平智业专利代理事务所(普通合伙) 11392 | 代理人： | 谢建玲;郝亮 |
| 地址： | 101149 北京市大兴区经济技*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种重组载体CAR‑CD244‑antiCD19的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为CD19抗体的部分序列，为序列表序列2；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序；将连接正确的质粒，命名为：重组载体CAR‑CD244‑antiCD19。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 载体 car cd244 anticd19 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种重组载体CAR‑CD244‑antiCD19的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为CD19抗体的部分序列，为序列表序列2；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序；将在所述改造的CD244骨架的克隆位点区连入antiCD19，得到的质粒命名为：重组载体CAR‑CD244‑antiCD19。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于国健呈诺生物科技（北京）有限公司，未经国健呈诺生物科技（北京）有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810984136.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
