[发明专利]一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法

摘要

本发明涉及一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：A、取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105‑1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006；发酵摇瓶中进行扩培，得康宁木霉发酵种子培养液；B、将油茶饼粕干燥、粉碎，得油茶饼粕粉末；将油茶饼粕粉末、蒸馏水、液体培养基投入发酵罐供氧发酵2‑3d，得油茶饼粕发酵液；C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按特定比例混合作为萃取剂，将油茶饼粕发酵液与萃取剂按质量比2.0‑4.0：1.0加入到亚临界提取装置进行萃取，得油茶饼粕磷脂提取物；D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物，得卵磷脂。本发明具有提取压力低、温度低，原料成本低，提取效率高，所得卵磷脂纯度高的有益效果。

主权项

1.一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105‑1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含8.0‑12.0g/L果糖、6.0‑10.0g/L麦麸、12.0‑16.0g/L蛋白胨、0.1‑0.3g/L尿素的MS液体培养基；取0.4‑0.6mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在25‑30℃条件下培养3‑5d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在25‑30℃，250r/min条件下供氧培养5‑7d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030‑0.050mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40‑80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末和蒸馏水投入到发酵罐中，然后注入适量液体培养基；称取油茶饼粕粉末质量8.0‑15.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至3.5‑5.5，在25‑30℃条件下供氧发酵2‑3d，氧浓度控制在0.030‑0.050mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比3.0‑5.0：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比2.0‑4.0：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为38‑45℃，提取压力为0.8‑1.2MPa，提取3‑5次，单次提取时间20‑40min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为50‑55℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：10.0‑15.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。