[发明专利]一种通过紫外诱导分生孢子筛选高虫草素蛹虫草菌株的方法

摘要

本发明涉及一种通过紫外诱导分生孢子筛选高虫草素菌株的方法，本方法是先分离纯化出分生孢子，然后通过紫外诱导筛选出高活性的分生孢子，再利用分生孢子全能性培育出高虫草素菌株，该诱导方式可以利用紫外线杀灭大部分无效孢子，且诱导变异率高，长子实体的能力强，对于后期子实体富集虫草素更有利。本方法分生孢子诱导育种的意义在于它从菌丝体诱导育种阶段进入到更微观的分生孢子诱导育种阶段，在生活史前端对其进行人工诱导干预，能更有效的筛选到价值菌株。

主权项

1.一种通过紫外诱导分生孢子筛选高虫草素蛹虫草菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在无菌条件下，用移液枪吸取200微升成熟的蛹虫草液体菌种，接种至PDA培养基上，用涂布棒将菌丝体涂抹均匀；(2)将涂布好菌丝体的PDA平板转移至生化培养箱中，19～21℃避光培养4～5天，使菌丝体长满至整个PDA平板；(3)设置光照强度500～2000lux，见光转色3～4天，使白色的菌丝体转色成橙黄色；(4)在无菌条件中，将PDA平板倒置成45°角，移液枪吸取无菌水轻轻冲洗菌丝体顶部5～10次，收集混合液；(5)将收集到的混合液分装至10ml的EP管中，设置4℃，离心力3000～5000g，离心10～15min，使菌丝体与分生孢子分离；(6)在无菌条件下，用显微镜观察上清液中是否含有分生孢子，用移液枪吸取含有分生孢子的菌液至PDA培养基中，涂PDA平板；(7)将涂布好的分生孢子平板放置在紫外灯下照射3～5min，再将其转移至生化培养箱中，设置25℃～26℃进行高温处理24h；(8)经过步骤(7)高温处理后，再设置生化培养箱的温度至16～18℃，对其进行低温培养4～5天；(9)对步骤(8)长出的菌落进行编号，并挑取菌落制备成液体菌种，再用传统的培植方法培植蛹虫草子实体60天；(10)将成熟的蛹虫草子实体采收、烘干后，采用高效液相检测蛹虫草子实体中的虫草素，子实体中虫草素≥1％所对应编号的菌株即为目的菌株。