[发明专利]一种促进人多能干细胞定向分化为成熟神经元的方法

摘要

本发明公开了一种促进人多能干细胞定向分化为成熟神经元的方法，通过神经诱导和神经分化培养基，使得人多能干细胞分化至神经元的方法，该方法可明显缩短分化获得成熟神经元所需的时间。与现有技术相比，本发明能够在较短时间内在体外诱导人多能干细胞至成熟神经元，大量节约了神经分化耗时，为神经退行性疾病的细胞移植治疗，药物筛选和病理机制研究提供细胞模型。

主权项

1.一种促进人多能干细胞定向分化为成熟神经元的方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)使用E8培养液培养人多能干细胞至细胞增殖为60～80％的密度；(2)将步骤(1)中得到的人多能干细胞用酶消化后，当天更换培养液为NIM培养液，此时为细胞分化的第0天；(3)细胞分化的第7天，向步骤(2)中所得混合体系中加入胎牛血清，并将细胞贴壁培养；4～12小时后更换NIM培养液；(4)细胞分化的第7～15天，每隔12～72h更换步骤(3)中所得体系中的NIM培养液；分化第16天，将形成的类神经管结构吹下，继续用NIM培养液悬浮培养；(5)细胞分化的第18天，在步骤(4)中所得的混合体系中用促神经成熟培养液替换NIM培养液；细胞分化的第18～23天，每隔12～72h更换促神经成熟培养液；(6)细胞分化的第23天，将步骤(5)中所得细胞贴壁培养，培养液替换为含B27细胞培养添加剂的促神经成熟培养液；(7)细胞分化的第26天，更换步骤(6)中所得混合体的培养基为NDM培养基，第26天后可观察到成熟神经元的形成。