[发明专利]一种在面部年轻化中脂肪干细胞外泌体的制备和应用

摘要

本发明提供了一种在面部年轻化中脂肪干细胞外泌体的制备和应用，包括脂肪干细胞分离、外泌体提取和脂肪干细胞外泌体‑纳米胶原蛋白包被；通过脂肪干细胞外泌体‑纳米胶原蛋白进行面部皮肤微雕整容，观察其相比脂肪干细胞自体移植、外泌体注射、或单纯纳米胶原蛋白在皮肤再生性修复和微整容方面的优越性；具体为，本发明通过分离脂肪干细胞，提取其外泌体，然后将纳米胶原蛋白与分离的外泌体融合形成脂肪干细胞外泌体‑纳米胶原蛋白联合制剂，注入新西兰大白兔受损皮肤部位，观察和单纯脂肪干细胞移植组、外泌体组和单纯纳米胶原蛋白相比，脂肪干细胞外泌体‑纳米胶原蛋白对受损皮肤再生的促进效果，同时观察其对身体有无伤害。

主权项

1.一种在面部年轻化中脂肪干细胞外泌体的制备和应用，其特征在于：包括脂肪干细胞分离、外泌体提取和脂肪干细胞外泌体‑纳米胶原蛋白包被；所述脂肪干细胞分离包括以下步骤：S1、取新西兰大白兔腹股沟处的脂肪组织，放入含有青链霉素的杜氏磷酸盐缓冲液中洗净血污，转入一个新的培养皿中，充分剪碎，加入消化液，移液器充分打匀，直到组织能够通畅的出入吸嘴；S2、将脂肪组织转入离心管中，37℃消化1h，定时摇晃，使组织和消化液充分混匀，消化完后，反复吹打消化液，分散组织块，制成细胞悬液，1200rpm离心5min，将上层的脂肪组织反复吹打最少1min，再次离心；弃掉上层成熟的脂肪组织和中层的消化液，再用基础培养基重悬底层的细胞；S3、先将细胞悬液用250μM的尼龙滤网过滤细胞悬液，再将所得滤液用孔径为80μM的尼龙过滤，除去大部分的成熟脂肪细胞，收集滤液，每次过滤后注意再用适量的基础培养基洗涤滤网，减少滤网上的细胞残留，将最后得到的滤液离心，吸弃漂浮的脂肪细胞，用基础培养基反复洗涤3遍；S4、细胞培养，最后一次用完全培养基重悬，接种，置于培养箱中常规培养，首次换液，弃去培养基，PBS反复洗涤5～6次，加入新鲜的完全培养基继续培养，重复3次换液直到细胞面基本干净。