[发明专利]一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法

摘要

本发明公开了一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，包括以下具体制备步骤：肾脏初步处理、肾脏脱细胞灌注、肾脏冲洗、脱水灭菌、搅拌消化、成胶。本发明利用灌注法通过肾动脉置管进行冲洗脱细胞，根据血管的分布，脱细胞液能够达到几乎每一处肾脏组织，使得脱细胞更加充分。且细胞破裂后的成分可随着液体流动，及时排出，脱细胞效率更高，大大减少可能的细胞内成分的残留，而且使用Triton X‑100和Type I DNase I联合灌注，既对细胞核成分进行充分洗脱，也最大限度保留了肾脏ECM的生物活性成分，使其能够发挥更好的生物学作用。

主权项

1.一种温敏型肾脏细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下具体制备步骤：一、肾脏ECM的制备：步骤一：肾脏初步处理：取动物肾脏，保留肾蒂结构，并且进行肾动脉置管，然后予以500ml双蒸水快速灌注冲洗2h，以去除肾脏血管中残留的血液成分；步骤二：肾脏脱细胞灌注：当冲洗结束后，利用1000ml的Triton X‑100快速灌注4h后，再用1000ml的Triton X‑100持续缓慢灌注12h，当Triton X‑100灌注完成后，利用50 U/ml Type I DNase I液快速灌注4h；步骤三：肾脏冲洗：当漂洗结束后，用双蒸水灌注冲洗2h，去除肾脏内残余Triton X‑100和Type I DNase I液；二、肾脏ECM水凝胶的制备：步骤一：脱水灭菌：当肾脏ECM的制备完成之后，将肾脏在冷冻干燥机中脱去水分，并且剪碎呈粉末状，同时导入环氧乙烷气体进行灭菌；步骤二：搅拌消化：将粉末状的肾脏ECM溶于含胃蛋白酶的0.1M盐酸中，并且在室温条件下搅拌消化；步骤三：成胶：当步骤二完成之后，向内加入1/9溶液总体积的灭菌10xPBS，并且利用灭菌1xPBS调整最终ECM水凝胶浓度为15mg/ml。