[发明专利]金-长余辉纳米粒子免原位激发检测成纤维细胞激活蛋白

摘要

金‑长余辉纳米粒子(Au‑PLNP)免原位激发检测成纤维细胞激活蛋白(FAPα)的方法，步骤如下：1)制备巯基丙酸修饰PLNP。2)在1)材料表面生长金纳米粒子。3)设计含有红外荧光染料‑脯氨酸‑其它氨基酸肽键(Pro‑X)‑巯基的多肽。4)将3)中多肽和Au‑PLNP连接发光能量共振转移(LRET)探针。5)FAPα可特异性剪断Pro‑X，使Au‑PLNP发射光恢复。在免原位激发条件下，该探针可定量检测FAPα。6)将LRET探针用于免原位激发光学成像。本发明优点：该Au‑PLNP制备方法操作简单，产物水分散性、生物相容性好，是良好的LRET供体。免原位激发检测FAPα方法灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强。该Au‑PLNP策略在免原位激发生物传感、成像、治疗以及拉曼增强检测等方面具有广泛的应用前景。

主权项

1.一种金修饰长余辉纳米粒子用于免原位激发检测成纤维细胞激活蛋白的方法，其特征在于简单快速地制备金修饰长余辉纳米粒子，得到的金修饰长余辉纳米粒子水分散性、生物相容性好，是一种良好的发光共振能量转移供体。将特定氨基酸序列的多肽和金修饰的长余辉纳米粒子连接得到发光共振能量转移(LRET)探针，在成纤维细胞激活蛋白存在时，LRET被抑制，金修饰长余辉纳米粒子的发光得以恢复。该LRET探针在免原位激发能定量检测成纤维细胞激活蛋白，特异性好，灵敏度高，检出限低，抗干扰能力强。步骤如下：1)将长余辉纳米粒子分散至水中，向其中加入巯基丙酸，室温搅拌12‑36小时，之后离心弃去上清液，所得沉淀用水洗3次，真空干燥。2)将巯基丙酸修饰后的长余辉纳米粒子分散至水中，向分散液中依次加入氯金酸溶液和氨水，最后加入还原剂抗坏血酸溶液，室温搅拌。离心弃去上清液，用乙醇、水洗三次，真空干燥，即可得到金修饰的长余辉纳米粒子。3)设计特定氨基酸序列的多肽。多肽序列中间含有由脯氨酸和其他氨基酸或小分子形成的肽键(Pro‑Xxx)，将近红外荧光染料小分子固定在肽键(Pro‑Xxx)的一侧，肽键(Pro‑Xxx)的另一侧有含巯基的氨基酸，这样的多肽序列可以被成纤维细胞激活蛋白特异性识别并剪断。4)将特定氨基酸序列的多肽和金修饰的长余辉纳米粒子连接得到LRET探针。固定在多肽序列上的染料小分子的紫外吸收与金修饰的长余辉纳米粒子的发射重叠，产生LRET进而导致金修饰的长余辉纳米粒子的发光被淬灭。5)成纤维细胞激活蛋白可以特异性识别并剪断肽键(Pro‑Xxx)，使得金修饰的长余辉纳米粒子的发光恢复。在免原位激发条件下，利用该探针可以定量检测成纤维细胞激活蛋白，同时可以实现活细胞内成纤维细胞激活蛋白的定量检测和生物成像。6)将该LRET用于小鼠成像，可准确指示肿瘤所在。