[发明专利]一种金花茶多糖的提取工艺

摘要

本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种金花茶多糖的提取工艺。本发明将金花茶粉用水解酶水解后通电配合超声萃取，采用CHCl3和正丁醇按体积比41组成的沉淀试剂去除蛋白质，之后用95％乙醇溶液对粗多糖再次提取精制并用己内酰胺和聚丙烯酰胺柱层析对提取得到的粗多糖进行再次纯化。本发明的技术优势在于用水解酶水解配合通电以及超声萃取处理金花茶粉末使得有效物质充分溶解，采用CHCl3和正丁醇按体积比41组成的沉淀试剂配合己内酰胺和聚丙烯酰胺柱层析对提取得到的粗多糖进行纯化，使得提取得到的金花茶多糖提取效率高、纯度高，且提取得到的金花茶多糖对免疫性肝损伤小鼠的肝脏具有更好地保护作用。

主权项

一种金花茶多糖的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：S1、将金花茶叶片清洗后用打粉机粉碎过10‑20目筛，得金花茶叶粉末；S2、取步骤S1所得金花茶叶粉末10‑20g置于锥形瓶中，加蒸馏水200‑600ml和0.4‑3.6g水解酶，调节pH至5‑6，在室温下向混合液中先通入常压正向电流处理10‑20s后通入常压反向电流处理6‑8s，反复处理40‑60min后切断电源，其中所述的通电频率为6‑8kHz、电流为4‑6kV；S3、将步骤S2通电处理后的混合液超声提取0.5‑2h后用2‑4层200目纱布过滤收集滤液，所得滤渣用所述超声方法再次提取，合并滤液浓缩得粗多糖；S4、磁力搅拌下向步骤S3所得粗多糖中加入沉淀试剂，搅拌20‑40min后放于3‑5℃冰箱中静置18‑24h，使蛋白质变性成不溶性沉淀聚集在沉淀试剂的界面上，1000‑2000r/min离心分离将蛋白质沉淀去除，重复操作直至沉淀试剂界面无沉淀，收集上清液和蛋白质沉淀备用；S5、将步骤S4所得上清液浓缩后搅拌下加入95％的乙醇溶液，将溶液中生成的絮状沉淀置于4‑6℃冰箱中静置20‑28h，2000‑4000r/min离心，得沉淀物；S6、将步骤S5所得沉淀物用4‑6倍体积水溶解后装入2‑4倍沉淀物质量的由己内酰胺和聚丙烯酰胺按质量比2:1组成的层析柱中，用3‑5倍柱体积水洗脱液于2‑3ml/min速度下洗脱，合并洗脱液并减压浓缩，冷冻干燥即得。