[发明专利]一种用于CLB检测的电化学免疫传感器及制备方法

摘要

本发明提供一种用于CLB检测的电化学免疫传感器及制备方法，该电化学免疫传感器具有基于MoS2‑AuPt纳米复合物和生物素‑链霉亲和素系统的工作电极，本发明所提出的电化学免疫传感器具有良好的灵敏度(检测限为6.86pg·mL‑1)，高特异性，可接受的重复性，同时也可用于实际猪肉样品中的检测。

主权项

1.一种用于CLB检测的工作电极，其特征在于：包括基底电极，所述基底电极上修饰有L‑半胱氨酸功能化的MoS₂、AuPt纳米复合物、链霉亲和素水溶液、生物素标记抗体CLB；优选地，所述基底电极为玻碳电极。

2.具有根据权利要求1所述的工作电极，其特征在于：所述工作电极上还孵育有待检测样品。

3.具有权利要求1或2所述工作电极的电化学传感器。

4.一种用于CLB检测的工作电极的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)在基底电极表面滴加L‑半胱氨酸功能化的MoS₂，再将MoS₂修饰的电极浸泡在含有AuPt纳米复合物的水溶液中，电沉积，使得金铂纳米颗粒(AuPt‑NPs)固定在被MoS₂修饰的电极表面；

(2)将链霉亲和素水溶液、生物素标记抗体CLB水溶液滴加至修饰电极表面，孵育，反应结束后，滴加BSA水溶液，孵育，得到所述基于MoS₂‑AuPt纳米复合物和生物素‑链霉亲和素系统的工作电极。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，L‑半胱氨酸功能化的MoS₂的制备方法如下：将MoS₂粉末分散于水中，形成的MoS₂水溶液，再与L‑半胱氨酸水溶液混合，离心清洗后，反应得到MoS₂；所述MoS₂水溶液浓度为0.5‑2.5mg/mL；优选为1.0‑2.5mg/mL，更优选为1.5‑2.5mg/mL，更优选为1.5mg/mL。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，含有AuPt纳米复合物的水溶液的制备方法如下：将Na₂SO₄水溶液分别加入HAuCl₄水溶液和H₂PtCl₆水溶液中，再混合该两种溶液，形成体积比为1：1的混合溶液，反应得到含有AuPt纳米复合物的水溶液；优选地，所述HAuCl₄水溶液的浓度、H₂PtCl₆水溶液的浓度均为5mg/mL，体积均为1mL；更优选地，所述HAuCl₄水溶液、H₂PtCl₆水溶液中分别加入浓度为0.2mol/L的Na₂SO₄水溶液0.5mL。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，电沉积时间为10‑60s，优选为30‑50s，更优选为30s；

和/或，步骤(2)中，链霉亲和素水溶液的浓度为0.5‑2.0μg/mL，优选为1.0‑2.0μg/mL；

和/或，步骤(2)中，生物素标记抗体CLB水溶液的浓度为1‑6μg/mL，优选为4‑6μg/mL；

和/或，所述基底电极为玻碳电极。

8.采用权利要求4‑7任一项所述制备方法制得的工作电极制备待检测电极的方法，其特征在于，向步骤(2)制得的工作电极表面滴加样品液，孵育得到待检测的工作电极；优选地，孵育时间为10‑60min；更优选地，孵育时间为20‑50min；更优选地，孵育时间为30‑50min。

9.采用权利要求2所述工作电极检测CLB的方法，其特征在于，将所述工作电极接入三电极电化学电池中，结合参比电极、对电极，在背景电流稳定后，向工作缓冲液中加入10μL H₂O₂水溶液，进行电化学检测；优选地，所述H₂O₂水溶液的浓度≥16mmol/L；更优选地，所述H₂O₂水溶液的浓度≥32mmol/L；更优选地，所述H₂O₂水溶液的浓度为32‑64mmol/L。

10.根据权利要求1或2所述工作电极、权利要求3所得的电化学传感器在肉类食品CLB检测中的用途。