[发明专利]一种磷酸化蛋白质富集修饰的方法和试剂盒

摘要

本发明属于蛋白质修饰富集分析领域，具体涉及一种磷酸化蛋白质富集修饰的方法和试剂盒。本发明利用磁性纳米材料Fe3O4/APTES与经水解成的磷酸化多肽螯合作用，以及Fe3O4/APTES中3‑氨丙基三乙基硅烷的正电荷与磷酸化多肽的负电荷的静电作用实现初次富集，并外加磁场分离溶液，再通过纳米TiO2对分离后的溶液进行二次富集；本发明还结合上述方法发明了相应的试剂盒。本发明相比于单一采用磁性纳米材料或普通TiO2进行富集，有效提高了磷酸化蛋白质的选择性富集效果，提升了质谱检测精度。

主权项

1.一种磷酸化蛋白质修饰富集的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、通过蛋白水解酶水解磷酸化蛋白质，得到溶于缓冲液中的磷酸化多肽溶液；S2、在磷酸化多肽溶液中加入磁性纳米材料，初次富集磷酸化蛋白质，得混合溶液；S3、在步骤S2所得混合溶液中外加磁场，使磁性纳米材料与溶液分离，得初次上层清液和初次下层固体；S4、收集初次下层固体，用Tris缓冲液清洗初次下层固体且外加磁场，分离得到二次上层清液和二次下层固体收集备用；S5、将初次上层清液和二次上层清液混匀，加入纳米TiO2进行二次富集，分离得三次下层固体和三次上层清液；S6、分别对二次下层固体和三次下层固体分别进行质谱分析。