[发明专利]一种快速克隆芥菜型油菜种皮基因TT2CDS序列的方法

摘要

本发明涉及一种取代从油菜种皮中提取TT2基因CDS序列的方法，因为叶片中TT2基因的mRNA表达较低CDS序列无法克隆，种皮取材不便。TTG1转录因子能促进TT2基因表达，通过过表达TTG1，提高TT2表达水平，可以方便TT2基因CDS的克隆。首先把油菜TTG1基因转化到发根农杆菌A4中，再用转化的侵染液侵染油菜外植体，再进行共培养，继代培养和扩增培养得到转基因的毛状根，取1g新鲜的转基因毛状根，进行RNA提取、反转录，再进行PCR反应，进行大肠杆菌转化，送公司测序。就能克隆出TT2基因，从而达到快速克隆控制油菜种皮颜色基因TT2CDS的目的。

主权项

1.一种快速克隆芥菜型油菜种皮基因TT2 CDS序列的方法，其特征是把构建好的TTG1基因转入到农杆菌A4的感受态中，再进行离心用等体积的MS液体重悬得到侵染液B,然后把油菜2周到3周龄的外植体，加入侵染液B中，在常温下浸染5‑10分钟，然后进行共培养,24‑48小时后，再转移到筛选培养进行培养，一周以后从外植体中剪下生长快速的毛状根，转移到继代培养基上，二周以后转移到液体培养基上进行扩大培养，一个月以后得到过表达的TTG1毛状根，TTG1表达可以促进TT2表达，从而可以克隆出来油菜TT2 CDS序列。