[发明专利]一种基于活性炭的烟草外植体防褐化方法

摘要

本发明涉及一种基于活性炭的烟草外植体防褐化方法，包括如下步骤：步骤（1），种子消毒；步骤（2），种子培养；步骤（3），烟草外植体培养；步骤（4），防褐化培养；步骤（5），生根培养；步骤（6），炼苗移栽。本发明不仅可以有效缓解烟草外植体褐化现象，还可以改善外植体整体的分化状态。根系不仅生长加快，而且质地柔韧不易折断，生根苗移栽成活率高。使用方便、成本低、效果好。

主权项

一种基于活性炭的烟草外植体防褐化方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤（1），种子消毒；步骤（2），种子培养：将步骤（1）得到的种子接种到MS培养基中培养，种子发芽长成幼苗；种子培养条件为：培养温度为25±1℃，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，光照时间为16h/d的条件下培养60d；步骤（3），烟草外植体培养：将步骤（2）中得到的幼苗，利用打孔器进行打孔得到烟草叶盘，将叶盘置于MS分化培养基中培养，培养条件为：28℃光照培养16h/d，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，25℃黑暗培养8h/d，培养5d，得到外植体；步骤（4），防褐化培养：将步骤（3）中得到的外植体置于MS防褐化培养基中培养，在28℃光照培养16h/d，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，25℃黑暗培养8h/d的条件下培养40d，MS防褐化培养基为MS基本培养基中添加0.5‑5g/L活性炭、30g/L蔗糖和4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.7；步骤（5），生根培养：将步骤（4）中得到的外植体置于MS生根培养基中培养，在28℃光照培养16h/d，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，25℃黑暗培养8h/d的条件下培养，培养10d时烟草生根；MS生根培养基为MS基本培养基中加入0.5‑5g/L活性炭、30g/L蔗糖和4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.7。步骤（6），炼苗移栽：待步骤（5）中得到的生根植株培养25d时，其根系发达后，打开封口膜，向培养瓶内倒入适量水至于温室内，水的位置高于培养基1‑2cm，放置阴暗处生长1‑2d后，带培养基一起置于稍干燥的天然土壤中，套上扎孔透明塑料袋，培养7d，移到室外。