[发明专利]一种基于液相色谱检测动物体中小分子代谢物的方法

摘要

本发明涉及代谢组学技术领域，尤其涉及一种基于液相色谱检测动物体中小分子代谢物的方法，主要包括人体样品制备，根据小分子代谢产物在人体血浆、组织和尿液中的含量差异，通过把血浆样品与组织样品或者血浆样品与组织样品或者组织样品与尿液样品或者血浆样品、组织样品与尿液样品混合，再进行荷质比步进扫描，结合MRM技术构建基础代谢数据库，然后通过基础代谢数据库中的离子对信息和保留时间检测不同类型的待测样品中的小分子代谢物，本发明的优点在于，能够对不同动物体中的小分子代谢物进行全面的、无差别的定性和定量分析，准确度和灵敏度高，通过不同样品的混合，使基础代谢数据库数据更全面，解决了不同样品中低丰度代谢物不易检测的问题。

主权项

一种基于液相色谱检测动物体中小分子代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：人体样品制备步骤1.1：血浆样品制备：取出冻存的血浆样本，解冻后取一定量的血浆于EP管中，按体积比例加入冰甲醇，经过涡旋和离心后取上清液于新的EP管中，冷冻保存；步骤1.2：组织样品制备：取出冻存的组织样本，将组织切碎，混匀后称量一定量的组织装入EP管中，按照重量比例加入提取液，依次经过匀浆、冰水浴和离心后，取上清液于新的EP管中，冷冻保存；步骤1.3：分别取等量的血浆样品和组织样品，混合均匀后装入进样瓶中，上机待测；步骤2：建立基础数据库步骤2.1：质谱仪参数设置；步骤2.2：以质荷比50‑1000每间隔 0.1‑1组成一级质谱母离子Q1等于二级质谱子离子 Q3的离子对，即 Q1=Q3，对上述离子对以采集方式为MRM‑IDA‑EPI进行分段跑样；步骤2.3：对每个文件找出一级质谱母离子Q1在相应时间被裂解所对应的二级质谱子离子Q3及二级质谱子离子Q4、Q5，峰保留时间(RT)；步骤2.4：以采集方式为MRM对步骤2.3所筛选出的离子对进行分段跑样，然后利用 Analyst数据处理软件的定量积分方法选出峰强度在1000cps以上的离子对；步骤2.5：对步骤2.4筛选出来的离子对再次以采集方式为 MRM‑IDA‑EPI进行分段跑样，进一步对一级质谱母离子Q1，二级质谱子离子 Q3、Q4，峰保留时间进行核对校准，去卷积，建立二级质谱子离子及保留时间为标签的基础代谢数据库；步骤3：检测不同类型的待测样品步骤3.1：制备不同类型的待测样品，装入进样瓶中，上机待测；步骤3.2：以采集方式为 MRM‑IDA‑EPI进行分段跑样，利用步骤2.5所建立的基础代谢数据库中的离子对信息及保留时间，检测不同类型的待测样品中的小分子代谢物。