[发明专利]一种用于同步辐射X射线荧光微分析的植物根部冷冻切片制作方法

摘要

本发明公开一种用于同步辐射X射线荧光微分析的植物根部冷冻切片制作方法。该方法包括样品前处理，改良OCT冷冻包埋剂，样品先用改良OCT冷冻包埋剂浸泡处理，改良OCT冷冻包埋剂为按聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮按一定比例混合而成，控制切片刀口温度，修剪时通过对样品的软硬程度与改良OCT冷冻包埋剂的软硬程度是否一致进行观察，采用延长冷冻时间或适当回温的有效措施，确保了对新鲜植物根部切片的成功率达到100％。本发明能够获得结构完整的新鲜植物根部组织冷冻切片，对开展新鲜植物根部组织同步辐射X射线荧光微分析，研究重金属、营养元素、微量元素在植物中的吸收累积微区分布，重金属对植物生理生态方面的影响提供了有力的技术支撑。

主权项

1.一种用于同步辐射X射线荧光微分析的植物根部冷冻切片制作方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品前处理：取1～2年生新鲜植物根部，洗净泥沙，用滤纸吸干植物根部表面水分，将植物根部切成小块，然后将小块置于改良OCT冷冻包埋剂中，在-4℃冷藏浸泡50min～120min；(2)样品冷冻包埋：在冷冻切片机箱体内的冷台底座表面先滴3～5滴改良OCT冷冻包埋剂，将长方形硬质纸框平面放在冷台底座表面，再将步骤(1)经前处理的样品放置在长方形硬质纸框内，在长方形硬质纸框内加入改良OCT冷冻包埋剂将样品包埋，调节箱体温度为-20℃，包埋冷冻10～20min后，长方形硬质纸框内的样品和改良OCT冷冻包埋剂冷冻为一体即为样品包埋块；(3)冷冻切片：①修片：在箱体温度控制为-20℃，切片刀口温度控制为-10℃的条件下，切去样品包埋块外的长方形硬质纸框，对样品包埋块进行修片切去样品包埋块表面的改良OCT冷冻包埋剂，使样品表面露出，观察样品的软硬程度与改良OCT冷冻包埋剂的软硬程度是否一致，样品的软硬程度与改良OCT冷冻包埋剂的软硬程度一致，则按下述②切片中所述的方法进行切片；②切片：在箱体温度控制为-20℃，切片刀口温度控制为-10℃的条件下，将切片厚度调节旋钮调至切片厚度为5μm～7μm，摇动旋转手轮对样品包埋块进行切片；(4)展片：将切下来的切片黏附于X射线荧光光谱仪专用胶带上，一块切片黏附于一块X射线荧光光谱仪专用胶带上，然后在室内室温条件下，将黏附有切片的X射线荧光光谱仪专用胶带固定在样品框上，再将样品框置于样品框架上即为展片；(5)冷冻干燥：展片后，将样品框架和其框架上的黏附有切片的X射线荧光光谱仪专用胶带的样品框一起放置于-80℃条件下，冷冻干燥24h-72h，即制成用于同步辐射X射线荧光微分析的植物根部冷冻切片；上述改良OCT冷冻包埋剂由质量浓度20％的聚乙烯醇水溶液和聚乙二醇按质量浓度20％的聚乙烯醇水溶液:聚乙二醇的体积比为2:1混合均匀得基础混合液，再加入为基础混合液重量1％的聚乙烯吡咯烷酮混合均匀而成。