[发明专利]一种肝癌生物学过程中转录组和蛋白组学的ELISA方法

摘要

本发明公开了一种肝癌生物学过程中转录组和蛋白组学的ELISA方法，①缓冲液将抗体稀释②在每个聚苯乙烯板的反应孔过夜；③次日，弃去孔内溶液，洗涤缓冲④加一定稀释的待检样品被之反应孔中，时后洗涤⑤于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体⑥孵育、洗涤⑦于各反应孔中加入临时配制的TMB⑧于各反应孔中加入终止液⑨结果判定本发明采用临床样本对其进行定位定量的表达验证，寻找其与临床相关性的证据，评价临床价值，为肝癌发病学和肝癌机制研究提供新的线索。课题筛选的肝癌关键分子将为探索与早期发现、分类、评价预后相关的肝癌标志物,以及选择更加有效、准确的肝癌治疗靶位奠定研究基础。

主权项

一种肝癌生物学过程中转录组和蛋白组学的ELISA方法，其特征在于：由以下步骤组成：①用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml；②在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜；③次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟；④加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时后洗涤（注意留出空白孔、阴性对照孔和阳性对照孔）；⑤于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml；⑥37℃孵育0.5～1小时，洗涤；⑦于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟；⑧于各反应孔中加入终止液0.05ml；⑨结果判定：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。