[发明专利]一种肝癌生物学过程中转录组和蛋白组学的免疫组化方法

摘要

本发明公开了一种肝癌生物学过程中转录组和蛋白组学的免疫组化方法，①组织切片脱蜡、水化②滴加、室温静置③PBS洗、加热0.01枸橼酸钠缓冲液，放入组织进行沸热修复④PBS洗⑤滴加正常山羊血清封闭⑥甩去多余液体 ⑦PBS洗⑧PBS或自来水冲洗10分钟⑨苏木精复染，盐酸酒精分化⑩冲洗脱水、透明、封片、镜检。本发明采用临床样本对其进行定位定量的表达验证，寻找其与临床相关性的证据，评价临床价值，为肝癌发病学和肝癌机制研究提供新的线索。课题筛选的肝癌关键分子将为探索与早期发现、分类、评价预后相关的肝癌标志物,以及选择更加有效、准确的肝癌治疗靶位奠定研究基础。

主权项

一种肝癌生物学过程中转录组和蛋白组学的免疫组化方法，其特征在于：由以下步骤组成：①组织切片脱蜡、水化后PBS洗2～3次各5分钟；②将3% H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室温静置10分钟；③PBS洗2～3次各5分钟；电炉或水浴锅加热0.01枸橼酸钠缓冲液（pH 6.0）至95℃左右，放入组织片片加热10‑15分钟进行沸热修复；④PBS洗2～3次各5分钟；⑤滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟；⑥甩去多余液体；滴加1抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（其中，4℃过夜后需在37℃复温45分钟）；⑦PBS洗3次各5分钟；滴加二抗（可加入0.05%的tween‑20）40～50μl，室温静置，或37℃1小时;PBS洗3次各5分钟;DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；⑧PBS或自来水冲洗10分钟；⑨苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；⑩自来水冲洗10～15分钟；脱水、透明、封片、镜检。