[发明专利]用于多重PCR文库构建的连接序列及其设计方法有效
申请号: | 201711111664.5 | 申请日: | 2017-11-13 |
公开(公告)号: | CN107988219B | 公开(公告)日: | 2018-11-02 |
发明(设计)人: | 糜庆丰;朱鹏远;吴春求;黄铨飞;王杨;周幸芝;吕来灰 | 申请(专利权)人: | 东莞博奥木华基因科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/6811;C40B50/06 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 523808 广东省东莞市松山湖高新技*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了用于多重PCR文库构建的连接序列及其设计方法。基于本发明的连接序列能通过PCR扩增实现标签、测序接头、目标片段的连接,其设计方法包括:获取候选序列集、候选序列初筛、e‑PCR分析;本发明的连接序列排除了与扩增体系中其他序列的相互干扰,构建的文库质量好,并且通用性强,不仅适于一步和两步扩增建库,还适于多种核酸测序文库的构建,如检测遗传性耳聋致病位点、苯丙酮尿症致病基因、肺癌靶向用药基因、乳腺癌BRCA1/2突变基因、安全用药基因的测序文库,基于连接序列的文库构建简化了建库流程,大大节约测序成本,还可应用于核酸测序试剂盒中,具有非常良好的市场应用前景。 | ||
搜索关键词: | 连接序列 文库构建 测序文库 多重PCR 测序 构建 建库 苯丙酮尿症 候选序列集 遗传性耳聋 安全用药 靶向用药 核酸测序 候选序列 扩增体系 目标片段 市场应用 通用性强 突变基因 致病基因 试剂盒 基因 乳腺癌 初筛 核酸 扩增 位点 文库 肺癌 标签 检测 节约 应用 | ||
【主权项】:
1.一种用于多重PCR文库构建的连接序列,所述连接序列设置于目标片段特异性引物的5’端,构成连接引物;所述连接序列还设置于测序接头的3’端,构成连接接头;基于连接序列的设置,通过PCR扩增实现目标片段与测序接头的连接,所述连接序列选自SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:6任意一条核苷酸序列。
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- 本发明公开了一种校对活性酶抑制剂及降低所述校对活性酶抑制剂在聚合酶链式反应中对校对活性酶活性抑制的方法,所述抑制剂为含有连续或不完全连续的n个G的寡核苷酸,n为大于4的正整数;所述不完全连续为n个G中间含有1个A、T或C;本发明提供一种校对活性酶抑制剂,富含G碱基的寡核苷酸能够抑制具有校对活性的DNA聚合酶的活性,使PCR扩增失败;通过将降低含有所述抑制剂的寡核苷酸浓度(降低至不大于0.1μM),或者将富含C碱基的寡核苷酸与富含G碱基的寡核苷酸互补配对后能够降低其抑制作用。
- 辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记及其选育方法和应用-201710167093.0
- 王志强;曾文芳;牛良;潘磊;丁义峰;鲁振华;崔国朝 - 中国农业科学院郑州果树研究所
- 2017-03-20 - 2019-08-30 - C12N15/11
- 本发明公开了一种辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记及其选育方法和应用,所述的分子标记包含有变异特征正向引物CACTA‑INS‑F、反向引物CACTA‑INS‑R以及无变异特征正向引物WILD‑F、反向引物WILD‑R。首先采用上述分子标记选出含有隐性基因hd的桃品种,然后用基因型hdhd的亲本与基因型为Hdhd的亲本或基因型为HdHd的优质亲本进行杂交,直到从后代中选出基因型为hdhd的SH肉质桃品种单株,并结合田间表型和乙烯测定,可以高效定向改良及培育桃SH肉质耐贮品种,对于桃果实耐贮运新品种的选育具有重要的现实意义。
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