[发明专利]一种用于高效检测循环肿瘤细胞的磁性材料及其制备方法

摘要

本发明提供了一种用于高效检测循环肿瘤细胞的磁性材料及其制备方法，制备方法包括：(1)将透明质酸、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、胱胺盐酸盐和二硫苏糖醇反应，制得HA‑SH；(2)将罗丹明接枝于HA‑SH上，制得RhB‑HA‑SH；(3)将Fe₃O₄纳米粒、RhB‑HA‑SH和H₂O₂反应，制得超顺磁性荧光HA‑SH；(4)超顺磁性荧光HA‑SH、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、PEG‑FA和anti‑EpCAM抗体反应，制得。该磁性材料饱和磁化强度高，磁响应性和生物相容性好，能够实现与循环肿瘤细胞的特异性结合，并具有一定的普适性。

主权项

1.一种用于检测循环肿瘤细胞的磁性材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将透明质酸溶于PBS缓冲液中，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和1‑羟基苯并三唑，搅拌反应2‑3h，然后再加入胱胺盐酸盐搅拌过夜，最后加入二硫苏糖醇继续反应24‑36h，制得HA‑SH；其中，透明质酸、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、胱胺盐酸盐和二硫苏糖醇的摩尔比为1‑2:2‑4:2‑4:2‑4:3‑6；反应式如下：(2)采用与步骤(1)同样的方法将罗丹明接枝于HA‑SH上，制得RhB‑HA‑SH；(3)将Fe₃O₄纳米粒分散在氯仿中，RhB‑HA‑SH溶于去离子水中，然后将两者混合，置于冰浴中，超声分散3‑4次，最后一次分散时加入H₂O₂，然后将所得物用PBS缓冲液洗涤，制得磁性荧光HA‑SH；其中Fe₃O₄纳米粒和RhB‑HA‑SH的重量比为1‑3:1‑3；(4)将超顺磁性荧光HA‑SH加入含有1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和1‑羟基苯并三唑的PBS溶液中，于4℃反应3‑5h，然后磁分离弃去上清液，然后分散于PBS中，接着加入PEG‑FA，室温反应3‑5h后置于4℃，再加入anti‑EpCAM抗体反应5‑7h，所得物经磁分离后用PBS洗涤，制得靶向功能超顺磁性荧光HA‑SH；其中超顺磁性荧光HA‑SH、含有1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、PEG‑FA和anti‑EpCAM抗体的重量比为1:95‑100:65‑70:1‑3:0.005‑0.015。