[发明专利]一组用于评估胶质母细胞瘤预后的联合蛋白及其应用

摘要

本发明涉及医学生物检测技术领域，提供了WDR1、NMI以及LIN28蛋白的新用途，具体是在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂盒中的应用，本发明进一步提供了一种采用免疫组化方法针对WDR1、NMI以及LIN28蛋白的定量检测来进行脑胶质母细胞瘤预后评估的试剂盒和检测方法。本发明利用免疫组化技术、系统评分测定脑胶质母细胞瘤组织中WDR1、NMI和LIN28蛋白的表达水平，并结合术后随访信息，确定WDR1、NMI、LIN28蛋白表达水平与手术后脑胶质母细胞瘤患者预后存在相关性，WDR1、NMI和LIN28蛋白联合能用于制备判断脑胶质母细胞瘤患者预后的蛋白分子标记，对于脑胶质母细胞瘤的分子分型、病人术后监控和序贯治疗也具有重要的指导意义。

主权项

1.一组联合蛋白在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂或预后评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述的联合蛋白为WDR1、NMI和LIN28蛋白的联合。

2.根据权利要求1所述的一组联合蛋白在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂或预后评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述的预后评估试剂为检测生物样品中WDR1、NMI、LIN28蛋白相对表达量的试剂的组合。

3.根据权利要求1所述的一组联合蛋白在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂或预后评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述的预后评估试剂盒包含了检测生物样品中WDR1、NMI、LIN28蛋白相对表达量的试剂的组合。

4.根据权利要求2或3所述的一组联合蛋白在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂或预后评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测生物样品中WDR1、NMI、LIN28蛋白相对表达量的试剂的组合包括WDR1、NMI、LIN28蛋白抗体以及与三种蛋白的定量检测相配套的试剂。

5.根据权利要求4所述的一组联合蛋白在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂或预后评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述定量检测为免疫组化检测，免疫组化检测试剂包括二甲苯、乙醇、H₂O₂体积分数为3％的H₂O₂‑甲醇液，1％BSA封闭液，柠檬酸盐缓冲液、DAB显色试剂，苏木素和辣根过氧化物酶。

6.根据权利要求2所述的一组联合蛋白在制备脑胶质母细胞瘤预后评估试剂或预后评估试剂盒中的应用，其特征在于，所述生物样品为脑胶质母细胞瘤患者手术切除的肿瘤标本切片。

7.一种脑胶质母细胞瘤预后评估试剂盒，该试剂盒包含了检测生物样品中WDR1、NMI、LIN28蛋白相对表达量的试剂的组合。

8.根据权利要求7所述的脑胶质母细胞瘤预后评估试剂盒，其特征在于，所述的预后评估试剂盒包含了WDR1、NMI、LIN28蛋白抗体系统以及与三种蛋白的定量检测相配套的试剂系统。

9.一种利用如权利要求7或8所述的预后评估试剂盒进行脑胶质母细胞瘤预后评估的方法，所述的检测方法包括以下步骤：

(a)利用试剂盒中的免疫组化实验试剂标记羊抗兔IgG，将脑胶质母细胞瘤组织切片进行免疫组化染色；

(b)光镜下观察脑胶质母细胞瘤组织染色情况，分别对WDR1、NMI、LIN28蛋白抗体染色细胞的阳性率及肿瘤细胞胞浆中WDR1、NMI、LIN28蛋白抗体染色的强度进行判读评分，并将每种蛋白的阳性率得分和强度得分进行乘积，然后根据乘积值得到每种蛋白的表达状态值1或2，1代表低表达组，2代表高表达组；

(c)根据Y＝α×A+β×B+γ×C计算每个样本的Risk值，再将每例样本Y值与通过X‑tile软件确定的最佳cut‑off值进行比较，将低于该值的病例判定为低危组，高于该值的病例判定为高危组，

其中A、B、C分别为每例标本中WDR1、NMI和LIN28蛋白的表达状态值；α、β、γ为系数，可通过Cox回归计算得出，分别为1.587、1.557、1.177。