[发明专利]抗寒月季组织培养繁育方法

摘要

本发明涉及一种抗寒月季组织培养繁育方法，解决此品种繁殖速度较慢，增殖系数低的生产问题，该方法包括以下的步骤：1）筛选外植体；2）外植体消毒；3）初代培养；4）增殖培养；5）壮苗培养；6）生根培养；7）移栽驯化。本发明以植株新长出的顶芽或侧芽为外植体，以MS为基本培养基，利用萘乙酸（NAA）、6‑苄氨基嘌呤（6BA），吲哚丁酸（IBA）激素调节，建立抗寒月季再生体系的方法。该发明一个增殖继代周期为4‑5周，增殖倍数控制在6‑8倍，且不受季节的影响，可极大提高种苗繁殖系数，为该品种栽培、应用提供科学、有效的繁殖方法，满足生产需求并进行产业化生产，亦可为其它抗寒月季品种繁殖提供参考。

主权项

一种抗寒月季组织培养繁育方法，其特征是：包括以下几个步骤：1)外植体筛选：春季，选择健康植株萌发出来的嫩芽，用枝剪将带新芽的枝条剪下，作为外植体；2)外植体消毒：带嫩芽的枝条切成小段，每段带有1‑3个芽，置于200mL烧杯中，杯口套上纱网后，采用自来水洗净后，加适量洗洁精在自来水处保持冲洗状态30‑40分钟，用滤纸吸干水分；在烧杯中加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液，使外植体材料完全浸泡其中，加入2滴吐温20制成消毒液，轻轻摇晃，6‑8分钟后倒掉烧杯中所有消毒液，向烧杯中倒入无菌水冲洗外植体材料4次，无菌水使用遵循先少后多原则，清洗至烧杯表面没有泡沫后，倒掉烧杯中无菌水，连带烧杯放置于超净工作台上；3)初代培养：将消毒好的外植体材料用已消毒滤纸吸干，切去外植体材料木质化部分及嫩芽展出叶片，插于基本培养基MS上，培养约30天，培养室内温度为22‑25℃，一个昼夜中培养室内光照时间为14小时，培养室内黑暗时间10小时，光照强度为1800‑2000勒克斯(Lux)，Lux为：照度的国际单位；4)增殖培养：将初代培养的外植体材料，转接于第一培养基上，所述培养基构成为：基本培养基MS附加0.01mg/L萘乙酸(NAA)和1mg/L 6‑苄胺基嘌呤(6‑BA)；蔗糖25g/L；琼脂粉5g/L；pH5.8‑6.2；培养室内适宜温度为22‑25℃，一个昼夜中培养室内光照时间为14小时，培养室内保持黑暗10小时，光照强度为2000勒克斯(Lux)，培养5‑6周，有少量不定芽萌发，切下不定芽接种于第二培养基上，所述培养基构成为：基本培养基MS附加0.05mg/L萘乙酸(NAA)和2mg/L6‑苄胺基嘌呤(6‑BA)；蔗糖30g/L；琼脂粉5g/L；pH5.8‑6.2；培养室内温度为22‑24℃，一个昼夜中培养室内光照时间为14小时，培养室内黑暗时间10小时，光照强度为2000勒克斯(Lux)；培养4‑5周，外植体材料分化不定芽数量增多，每个外植体萌发出6‑8个小侧芽；若需大量繁殖种苗，可进行重复培养；5)壮苗培养：将长到1‑2cm长的丛生芽剪切后移入壮苗培的基本培养基MS中，培养3‑4周，丛生芽长成无菌苗，无菌苗长到2‑4cm高度即可转入生根培养基中，增殖培养中较大的无菌苗可直接转入生根培养基中，培养室内22‑25℃，一个昼夜中培养室内光照时间为14小时，培养室内保持黑暗10小时，光照强度为1800‑2000勒克斯(Lux)；6)生根培养：将无菌苗转接至生根培养基；所述培养基构成为：基本培养基MS培养基中大量元素含量减半，所述减半大量元素，由质量百分比浓度，950mg/L的硝酸钾(KNO3)，220mg/L的氯化钙(CaCl2·2H2O)，185mg/L的硫酸镁(MgSO4·7H2O)，825mg/L的硝酸铵(NH4NO3)，85mg/L的磷酸二氢钾(KH2PO4·H2O)组成；附加1mg/L萘乙酸(NAA)；1mg/L吲哆丁酸(IBA)和活性炭3000mg/L；蔗糖30g/L；琼脂粉5g/L；pH5.8‑6.2；培养室温度为24‑26℃，一个昼夜中培养室内光照时间为14小时，培养室内保持黑暗10小时，光照强度为1800‑2000勒克斯(Lux)，培养10天，无菌苗长出乳白色根须，根长度为0.8‑1.5cm为宜；7)移栽驯化：待无菌苗根长大部分为0.8‑1.5cm时，将其移置过渡培养间，瓶膜不完全揭开，敞开约1/3，以保持瓶内与过渡间环境一致，放置2天后，去掉瓶膜后再放置1天；采用水温20‑22℃的水轻轻洗去无菌苗根部附着的培养基，将其移栽到装有珍珠岩和蛭石体积比为2：1的苗盘中，在半遮阴条件下放置5‑7天后，在温室驯化培养，30天后，计算成活率，即完成组织培养繁育。