[发明专利]一种抑制外显子剪切抑制子功能的反义寡核苷酸的筛选方法有效
| 申请号： | 201711020669.7 | 申请日： | 2017-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN108265053B | 公开（公告）日： | 2020-10-13 |
| 发明（设计）人： | 贾荣;郭继华;车晓轩 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 彭劲松 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种抑制外显子剪切抑制子功能的反义寡核苷酸的筛选方法。包括如下步骤：1）获得靶基因的外显子剪切抑制子和临近的基因序列。2）根据序列设计和合成一系列经硫代修饰的反义寡核苷酸。3）将反义寡核苷酸转染到细胞中，并在24小时后提取总蛋白。用western杂交法确定与靶基因外显子剪切抑制子结合效果最好的反义寡核苷酸。4）根据步骤3）获得的反义寡核苷酸的序列，合成2'‑O‑Methyl和硫代修饰的反义寡核苷酸，并转染细胞，用RT‑PCR的方法确定其可以高效地抑制外显子剪切抑制子功能。该方法适用于经济地筛选可以高效地抑制外显子剪切抑制子功能的反义寡核苷酸，具有良好的开发和应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 外显子 剪切 功能 反义 寡核苷酸 筛选 方法 | ||
【主权项】：
1.一种抑制外显子剪切抑制子功能的反义寡核苷酸的筛选方法，其特征在于，依次包括如下步骤：1）获得靶基因的外显子剪切抑制子和临近的基因序列；2）根据序列设计和合成一系列经硫代修饰的反义寡核苷酸；3）将反义寡核苷酸转染到HEK 293细胞中，并在24小时后提取总蛋白；用Western杂交法检测该基因的蛋白表达水平，确定与靶基因外显子剪切抑制子结合效果最好的反义寡核苷酸；4）根据步骤3）筛选到的反义寡核苷酸的序列，合成每个碱基被2'‑O‑Methyl和硫代修饰的反义寡核苷酸，并转染细胞；用RT‑PCR的方法检测靶基因的外显子的可变剪切，确定效果该反义寡核苷酸能够高效地抑制外显子剪切抑制子的功能，促进外显子保留在mRNA中。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉大学，未经武汉大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201711020669.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
