[发明专利]一种液相色谱质谱同步测定环境水体中抗生素的方法

摘要

本发明提供了一种液相色谱质谱同步测定环境水体中抗生素的方法，其特征在于，具体包含以下步骤步骤1、从实验器皿上降低背景干扰步骤2、样品制备步骤3、样品保存稳定步骤4、固相萃取富集水相中待测物步骤5、样品净化洗脱；步骤6、浓缩再富集；步骤7、利用高效液相色谱串联质谱同步上机测定。本发明吸收了固相萃取良好的富集能力与液相良好分离能力，以及加入标准内标物精确定量特点，使得检测不同类型的环境水体中痕量抗生素效果显著。本发明通过对固相萃取洗脱溶剂、液相分离流动相、质谱条件等重要方面均进行了探索和试验。

主权项

一种高效液相色谱质谱同步测定环境水体中抗生素的方法，其特征在于，其特征在于，具体包含以下步骤：步骤1、从实验器皿上降低背景干扰：实验开始前，让非定量棕色的玻璃器皿经过马弗炉高温持续烘烧；定量的玻璃器皿经过超声清洁，有机溶剂冲洗干净后取用；步骤2、样品制备：对悬浮物较多的环境样品进行预处理，用玻璃纤维滤膜过滤，将滤液盛放至干净非定量棕色的玻璃器皿中；步骤3、样品保存稳定：水样预处理之后加入一定量硫酸，调节至Ph3‑4，以抑制微生物对待测化合物的降解；同时加入5％甲醇，以增大水中待测物的溶解度，冷藏保存；步骤4、固相萃取富集水相中待测物：准确量取200～1000mL过滤后的水样，加入0.1‑0.5g乙二胺四乙酸四(Na4EDTA)，再加入浓度为50ug/ml的7种混合内标，包括有红霉素13C‑D3、磺胺甲恶唑D4、磺胺甲嘧啶、甲氧苄啶‑D3、赛本咪唑‑D4、磺基水杨酸甲氯环素、环丙沙星‑D8充分摇匀；连接检查固相萃取系统，按顺序分次加入甲醇和超纯水以此活化固相萃取Oasis HLB柱，最后加入2mL稀硫酸对柱子进行酸化，以5～10mL/min流速加载水样通过Oasis HLB柱；待水样全部通过Oasis HLB柱后，用超纯水清洗柱子，以去除残留在柱里的乙二胺四乙酸四(Na4EDTA)以及部分疏松的杂质；步骤5、样品净化洗脱：在抽真空条件下，干燥1.5～3小时去除残留的水分。接着用12mL甲醇以0.4～1.0mL/min的流速洗脱待测物；洗脱液收集在15mL具塞玻璃刻度离心管中；步骤6、浓缩再富集：保持氮吹系统气源充足，随后将洗脱液缓慢浓缩至近干，用1mL甲醇准确定容后，涡旋混匀，最后取0.22微米有机相滤膜过滤与2mL棕色进样小瓶中，在‑18℃下避光保存待检；步骤7、利用高效液相色谱串联质谱同步上机测定环境水体中抗生素。