[发明专利]一种具有可逆修饰的凝聚素基亲和色谱柱的制备方法

摘要

本发明涉及一种配基可逆修饰的亲和色谱柱的制备方法，属于材料技术领域。该制备方法为通过纤维素的阴离子液体溶液与乳化剂混合形成双乳化溶液，之后将其倒入色谱柱中，除去多余的油相和离子液体，得到多孔纤维柱材料。并采用基质中螯合的铜离子与亲和配基物理性结合，并可通过吸附/解析反应使此亲和色谱柱再生利用。结果表明，由IDA改性后的纤维素柱结晶度略微降低，但结构未改变，保持了良好的机械性能。亲和色谱对糖蛋白的吸附量高达18.9 mg mL‑1，并且循环使用后保持良好的吸附效率。以上结果表明该方法制备的配基可逆修饰的亲和色谱柱材料是一种能高效应用于蛋白质吸附等领域的活性材料。

主权项

一种具有可逆修饰的凝聚素基亲和色谱柱的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将无水的高结晶度纤维素溶于氯化1‑丁基3‑甲基咪唑，油浴反应温度为80~110℃，在磁力搅拌下反应11~13小时，形成浓度为5~10 wt%的溶液;（2）将环己烷和吐温60加入上诉溶液，加入比例分别为0.5~1.0和0.05~0.1，进行磁力搅拌，转速为2000rpm，形成纤维素乳化溶液；（3）迅速将上述油/水乳化液倒入至玻璃色谱柱中，冷却后加入0.1~0.3M的硫酸钠溶液进行侵泡，分别用酒精和蒸馏水冲洗，用乙二醇二环氧丙醚进一步交联，得到多孔纤维素柱；（4）将上述纤维素柱与高点酸钠溶液作用4.0小时，然后将50℃的0.5M PEHA与0.1M氢氧化钠混合液循环作用12小时，依次与三种溶液（戊二醛，0.2M, pH9.0, 2.5h; IDA, 0.1M, pH11, 12h, 70℃; CuSO4, 0.5M, Ph5.0, 2h）作用，得到Cu(II)‑IDA‑MCM型纤维素柱；（5）将上述纤维素柱依次与1 mg mL‑1凝聚素（Con A）在4℃下作用12h，得到Con A‑Cu(II)‑IDA‑MCM型亲和色谱柱。