[发明专利]一种用于离体细胞水溶性代谢物的二维核磁共振检测方法有效
| 申请号： | 201710832512.8 | 申请日： | 2017-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN107607572B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 曾庆师;李红霞;张照涛;徐延杰;李福艳;史文琦;王潇;高文静;王璇 | 申请（专利权）人： | 山东大学齐鲁医院 |
| 主分类号： | G01N24/08 | 分类号： | G01N24/08 |
| 代理公司： | 37221 济南圣达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王志坤<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 250014 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于离体细胞水溶性代谢物的二维核磁共振检测方法。方法具体为：1)将培养好的细胞用冰冻的磷酸盐缓冲液冲洗离心后收集细胞沉淀；2)向细胞沉淀中加入含硅酸钠的磷酸盐缓冲液提取细胞系水溶性代谢物；3)取步骤2)水溶性代谢物提取液进行二维核磁共振检测，得到水溶性代谢物相对含量。该方法通过对细胞预处理、提取水溶性代谢物、核磁共振检测等步骤进行合理优化，从而提高对水溶性代谢物的提取效率和检测，实现对离体细胞水溶性代谢物水平变化的准确测定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 体细胞 水溶性 代谢物 二维 核磁共振 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于离体细胞水溶性代谢物的二维核磁共振检测方法，其特征在于，所述方法具体为：/n1)将培养好的细胞用冰冻的磷酸盐缓冲液冲洗离心后收集细胞沉淀；/n2)向细胞沉淀中加入含硅酸钠的磷酸盐缓冲液提取细胞系水溶性代谢物；/n3)取步骤2)水溶性代谢物提取液进行二维核磁共振检测，得到水溶性代谢物相对含量；/n所述步骤1)中磷酸盐缓冲液浓度为0.4～0.5M，pH7.0～7.4；/n所述步骤2)具体方法为：按质量体积比为1:3～8向细胞沉淀中加入含硅酸钠的磷酸盐缓冲液，冰浴中进行超声破碎，离心去除细胞碎片，分离得上清液即为所需细胞系水溶性代谢物提取液；/n超声波功率为300～400W，超声程序为：超声7～9秒，间隔6～8秒，超声15～20次；/n用水配制步骤2)中所述含硅酸钠的磷酸盐缓冲液，所用水中重水含量为100％，w/v；所用三甲基硅基丙酸盐内标含量为0.001％，w/v；所述硅酸钠含量为0.0003％，w/v；乙基苯基聚乙二醇含量为1％，v/v；配制后的磷酸缓冲液的pH值为7.2；/n所述步骤3)核磁共振探头采用超低温探头，工作频率为600.13MHZ，扫描序列选用含抑水脉冲的zgpr序列，机器自动匀场；/n所述细胞为胶质瘤细胞系U87。/n
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