[发明专利]处理牛体细胞克隆胚的方法

摘要

本发明公开了处理牛体细胞克隆胚的方法。具体的说，该方法包括以下步骤：1)将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚进行激活处理；2)牛体细胞克隆胚在进行激活处理后，转移到G1.3培养液中培养。本发明还涉及在牛体细胞克隆胚的激活过程中使用的培养液以及在牛体细胞克隆胚体外培养过程中使用的培养液。本发明方法呈现如本发明说明书所述优异技术效果。

主权项

1.处理牛体细胞克隆胚的方法，该方法包括以下步骤：1)将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚进行以下激活处理：首先在含5μmol/L离子霉素的mSOF溶液中室温孵育4min，然后在含2mmol/L的6‑DMAP和1μmol/L的Oxamflatin的mSOF溶液中，在38.5℃、5%CO₂、饱和湿度条件下培养4h；2)牛体细胞克隆胚在进行激活处理后，转移到含0.5~1.5μmol/L的Oxamflatin的G1.3培养液中，在38.5℃、5%CO₂、饱和湿度条件下培养4~12h，再用G1.3培养液清洗多次，继续在G1.3培养液中培养至72h；然后将牛体细胞克隆胚转移到G2.3培养液中继续在38.5℃、5%CO₂、饱和湿度条件下培养至第7d；其中：所述牛体细胞克隆胚是通过基于体细胞核移植构建的；所述mSOF溶液是以SOF培养液作为基础培养基，还包含有体积分数2%的BME、体积分数1%的MEM、体积分数1%的ITS、1mmol/L的谷氨酰胺、80mg/mL的BSA、100IU/mL的青霉素和0.1mg/mL的链霉素；步骤1)中进行激活处理时，所用的mSOF溶液中与Oxamflatin一起还增补添加了相对于Oxamflatin而言5倍摩尔量的丙二醇，并且还增补添加了相对于Oxamflatin而言2倍摩尔量的蔗糖；步骤2)中进行培养时，所用的G1.3培养液中与Oxamflatin一起还增补添加了相对于Oxamflatin而言5倍摩尔量的丙二醇，并且还增补添加了相对于Oxamflatin而言2倍摩尔量的蔗糖。