[发明专利]一种阿莫西林人工抗原的合成方法

摘要

一种阿莫西林人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明包括将阿莫西林母核结构类似物舒巴坦与阿莫西林半抗原进行偶联，得到新的阿莫西林半抗原，再通过氯甲酸异丁酯法将半抗原与牛血清白蛋白BSA偶联，透析后得到阿莫西林完全抗原。通过凝胶电泳分析完全抗原和BSA的蛋白条带得出阿莫西林成功偶联到BSA上，并通过动物免疫得到的抗体证实了人工抗原成功合成。本合成方法增大了阿莫西林的分子量近一步增强了阿莫西林的免疫原性，增强免疫效果，为阿莫西林高灵敏抗体的制备提供了重要的依据。

主权项

一种阿莫西林人工抗原的合成方法，其特征在于包括如下步骤：半抗原的合成将阿莫西林与舒巴坦以1:1.2~1:2的摩尔比通过碳二亚胺法进行偶联，首先将舒巴坦用2‑吗啉乙磺酸缓冲液进行溶解，然后舒巴坦与碳二亚胺以1:3~1:5的摩尔比加入碳二亚胺溶液，在磁力搅拌的状态下反应2h后，将反应液冷冻干燥，从而得到偶联舒巴坦的阿莫西林半抗原固体；完全抗原的合成将步骤（1）得到的半抗原2mg用1mL N‑N二甲基甲酰胺进行溶解，加入20μL三正丁胺，在4℃条件下反应20min后再加入35μL氯甲酸异丁酯继续反应2h，将其以30:1~70:1的摩尔比在搅拌状态下逐滴加入到0.01M pH7.2的羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液溶解的牛血清白蛋白BSA中反应5h；将偶联产物在4℃条件下用生理盐水进行透析，每隔3h换一次透析液，一共透析四次，得到阿莫西林完全人工抗原；人工抗原的鉴定将步骤（2）得到的人工抗原通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS‑PAGE分析阿莫西林与BSA的偶联效果，并通过考马斯亮蓝法测定偶联物蛋白的含量。