[发明专利]一种从外周血中高效高纯度扩增自然杀伤细胞的方法有效
| 申请号： | 201710673718.0 | 申请日： | 2017-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN107326008B | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 李新峰;周雁冰;汪佳莹 | 申请（专利权）人： | 上海莱馥医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201114 上海市闵*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从外周血中高效高纯度扩增自然杀伤细胞的方法，包括：采集100～200ml的外周血，分离单个核细胞，把单个核细胞放入被CD16单抗和CD226单抗包被过的培养瓶中培养，同时用IFN‑γ激活细胞；激活24小时以后，培养基中加入IL‑2、IL‑15、IL‑21、OK432、CD2单抗和灭活的自体血清；随后把细胞转移到没有被CD16单抗和CD226单抗包被过的培养瓶中培养，每2‑3天给细胞补液一次；最后把细胞转移到培养袋中培养，第21天收集NK细胞即可。本发明不使用任何异源血清成分和滋养层细胞，从而确保了所制得NK细胞的安全性和可靠性，具有良好的临床应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 单抗 外周血 自然杀伤细胞 单个核细胞 细胞转移 高纯度 培养瓶 包被 扩增 激活 细胞 滋养层细胞 临床应用 自体血清 培养基 培养袋 血清 补液 放入 灭活 异源 采集 | ||
【主权项】：
1.一种从外周血中高效高纯度扩增自然杀伤细胞的方法，包括：采集100～200ml的患者外周血，分离单个核细胞，把单个核细胞放入被CD16单抗和CD226单抗包被过的培养瓶中培养，同时用IFN‑γ激活细胞；激活24小时以后，培养基中加入IL‑2、IL‑15、IL‑21、OK432、CD2单抗和灭活的自体血清；随后把细胞转移到没有被CD16单抗和CD226单抗包被过的培养瓶中培养，每2‑3天给细胞补液一次；最后把细胞转移到培养袋中培养，一共培养21天以后，收集NK细胞即可；其中，CD16单抗的浓度为2μg/ml，CD226单抗的浓度为1μg/ml；IFN‑γ的浓度为1000U/ml；灭活自体血清的浓度为5％、OK432的浓度为1μg/ml、IL‑2的浓度为1000U/ml、IL‑15的浓度为100U/ml、IL‑21的浓度为30ng/ml、CD2单抗的浓度为100ng/ml；所述补液仅添加IL‑2、IL‑15、IL‑21和灭活的自体血清。
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