[发明专利]一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法

摘要

本发明提供一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，通过在Fe₃O₄磁纳米粒子悬液中添加1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺进行活化后，与适配体DNA1偶联制备Fe₃O₄‑DNA1悬液；在金纳米粒子上修饰适配体互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶，形成DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物；Fe₃O₄‑DNA1悬液、待测试样、DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物溶液混合，检测pH。本发明提出的方法，以金纳米材料为载体进行乙酰胆碱酯酶和互补链的功能化，通过目标物驱动功能化金/磁纳米粒子的组装，建立目标物浓度与pH值的线性关系，是一种简便快捷、高灵敏度、高选择性的检测方法。

主权项

1.一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，其特征在于，包括操作：通过在Fe₃O₄磁纳米粒子上修饰1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺，制备活化后的Fe₃O₄磁纳米粒子，再与DNA1偶联，制备Fe₃O₄‑DNA1悬液；在金纳米粒子上修饰适配体DNA1的互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶，形成DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物并分散于磷酸缓冲液中；Fe₃O₄‑DNA1悬液、待测试样、DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物溶液混合，用磁铁分离，磁铁吸附的样品重悬于pH 6.0的乙酰胆碱溶液中，水解后用pH计或pH试纸进行检测；其中，所述Fe₃O₄磁纳米粒子的粒径为50～200nm，Fe₃O₄磁纳米粒子经SiO₂包覆、氨基化后与过量的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺在室温下孵育20～40min，然后通过磁分离去除残留的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺，取DNA1与活化的磁纳米粒子反应5～8h，然后重悬于超纯水中储存在2～6℃下备用；所述的氨基化的操作为：Fe₃O₄磁纳米粒子经SiO₂包覆后，加入硅酸四乙酯，搅拌10～20h后，用乙醇和水洗涤、干燥，干燥后的磁纳米粒子、与3‑氨丙基‑3‑乙氧基硅烷混合，所述Fe₃O₄磁纳米粒子和3‑氨丙基‑3‑乙氧基硅烷的接入比例为0.1～0.5g：5mL；加入无水乙醇，在50～70℃下反应5～8h。