[发明专利]一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法。本发明首先将铁皮石斛茎段切割成厚度0.2cm以上的茎段薄片，接种于接种培养基上不经历愈伤组织阶段直接分化获得无菌苗，当无菌苗长至3‑5片叶时，移植到增殖培养基上，可快速获得大量无菌苗。利用该方法进行铁皮石斛的组织培养扩繁，可节约从田间铁皮石斛植株获得无菌苗的时间，快速获得大量遗传背景一致的种苗群体，满足商品苗对扩繁一致性、稳定性的要求。本发明采用茎段薄片0.2cm以上即可，不需要必须有节点，大大增加了外植体的获取数量。

主权项

1.一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，1)培养基制备接种培养基为：MS+6‑BA 0.125‑0.25mg/L+NAA 0.125‑0.375mg/L+2，4‑D 0.5‑1.5mg/L+KT 0.125‑0.25mg/L；增殖培养基为：蒸馏水+花宝1号1.4‑1.6g/L+花宝2号0.30‑0.35g/L+牛骨蛋白胨1.5‑1.6g/L+活性炭1.5‑1.6g/L+MS母液中的6、7部分各10‑12ml/L+蔗糖18‑20g/L+琼脂粉5.5‑6.0g/L+香蕉泥100‑120g/L；所述MS母液中的6部分为：硼酸0.62g/L，硫酸锰1.86g/L，硫酸锌0.86g/L，碘化钾0.083g/L，钼酸钠0.025g/L，硫酸铜0.0125g/L，氯化钴0.0125g/L；所述MS母液中的7部分为：肌醇10g/L，甘氨酸0.2g/L，烟酸0.05g/L，盐酸吡哆辛0.03g/L，盐酸硫胺素0.02g/L；2)外植体预处理与接种培养采用健康铁皮石斛的茎段作为外植体，将外植体洗涤、灭菌后将茎段横切为厚度0.2cm以上的茎段薄片，然后接种于接种培养基上光培养25±2天，外植体上生芽，继续光培养至无菌苗长出3‑5片叶时进行增殖；3)无菌苗接种当无菌苗长出3‑5片叶时，将无菌苗移植到装有增殖培养基的组织培养瓶中，光培养15‑25天，每棵无菌苗分生出20‑30棵小苗；4)壮苗培养、生根培养和出瓶炼苗将增殖的铁皮石斛苗经壮苗培养和生根培养后；选取根系发达及健壮的铁皮石斛放在温室驯化2‑3天；清洗干净根部的培养基，移栽至已浇透水的树皮基质中继续培养至植株长大。