[发明专利]一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法

摘要

本发明公开了一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，属于生物领域，以解决现有方法存在愈伤组织诱导中褐化严重、不易分化的问题。一种蒙古沙冬青离体快速繁殖的方法，包括蒙古沙冬青外植体的获得、丛生芽的诱导培养、丛生芽的伸长培养、生根培养、扩大繁殖步骤。本发明与现有的蒙古沙冬青离体培养相比，取子叶节这个部位直接进行丛生芽的诱导，再生根。这个过程不发生愈伤组织从而减少了愈伤组织诱导的步骤，通过子叶节直接培育成不定芽，极大地缩短了离体培养的时间，整个过程从种子萌发、子叶节的获得、丛生芽的诱导与伸长到生根仅需79d。

主权项

1.一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于包括如下步骤：A、蒙古沙冬青外植体的获得：取消毒的蒙古沙冬青种子，在无菌条件下接种到含2.0mg/L 6‑BA的MS培养基中，黑暗培养7‑11d后，切取萌发幼苗的两片子叶节作为外植体；B、丛生芽的诱导培养：将所述步骤A中得到的外植体近轴面朝上，倾斜插入B5培养基中，黑暗培养，然后用辅助光诱导15—20d；所述步骤B中丛生芽诱导培养基为含1.0 mg/L 6‑BA的B5培养基；C、丛生芽的伸长培养：从子叶节处诱导出丛生芽后，剔除剩余子叶，转接于B5培养基中，黑暗培养，然后用辅助光下伸长培养20—25 d；所述步骤C中伸长培养基为含1.0 mg/L 6‑BA和0.2‑0.3mg/LIAA的B5培养基；D、生根培养：将所述步骤C中长度为2‑3cm的丛生芽单株切下转接到B5培养基中培养7‑10d后，转接入B5培养基生根培养基中诱导20—30d；所述步骤D中生根培养基为含1.0‑2.0mg/LIBA的1/2 B5培养基；E、扩大繁殖：切割所述步骤D中获得的完整植株的带腋芽的茎段，转入到含1.0mg/L 6‑BA和0.2‑0.3mg/LIAA的B5培养基，黑暗培养，然后用辅助光下伸长培养20—25d；待植株生长到2‑3cm，转接入含1.0‑2.0mg/LIBA的1/2 B5培养基中诱导生根30—40d。