[发明专利]一种检测乙氧酰胺苯甲酯的免疫试剂盒、制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种检测乙氧酰胺苯甲酯的免疫试剂盒、制备方法及应用，属于免疫学检测领域，所述试剂盒包括包被有乙氧酰胺苯甲酯抗原的酶标板、乙氧酰胺苯甲酯单克隆抗体液、酶标或荧光标记的羊抗鼠二抗抗体、乙氧酰胺苯甲酯标准品溶液、洗涤液和稀释液；所述乙氧酰胺苯甲酯抗原是乙氧酰胺苯甲酯半抗原与载体的偶联物，所述载体为卵清蛋白、牛血清白蛋白、甲状腺蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白或多聚赖氨酸中的一种或两种。采用该试剂盒检测动物性食品中乙氧酰胺苯甲酯残留，具有灵敏度、精密度和准确度高，特异性强，交叉反应率低，稳定性好，储存时间长，操作简便，快捷，适合现场大批量样品初筛检测等优点，有助于简化该药物的残留分析。

主权项

1.一种检测乙氧酰胺苯甲酯的免疫试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、乙氧酰胺苯甲酯半抗原的制备以对氨基水杨酸为原料，甲酯化后，在1w‑9w的微波环境中进行乙基化反应，制备4‑氨基‑2‑乙氧基苯甲酸甲酯；或，以4‑硝基‑2‑乙氧基苯甲酸为原料，经过甲酯化和还原后，制备4‑氨基‑2‑乙氧基苯甲酸甲酯；步骤二、乙氧酰胺苯甲酯抗原的制备采用重氮化法或戊二醛法，将步骤一制备的乙氧酰胺苯甲酯半抗原与载体进行偶联，合成制备乙氧酰胺苯甲酯包被原和免疫原；所述载体为卵清蛋白、牛血清白蛋白、甲状腺蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白或多聚赖氨酸中的一种或两种；步骤三、乙氧酰胺苯甲酯单克隆抗体的制备将步骤二合成的免疫原与佐剂进行等体积比乳化，加入氧化石墨烯纳米颗粒或硅胶纳米颗粒，制备产乙氧酰胺苯甲酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；在杂交瘤细胞株制备过程中，加入人类干细胞因子、白介素‑3、重组人类粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子、人类碱性成纤维细胞生长因子和小鼠骨髓瘤细胞与脾细胞进行细胞融合，再加入杂交瘤细胞融合克隆因子，混匀后培养制得；将杂交瘤细胞株进行放大纯培养，生产制备乙氧酰胺苯甲酯单克隆抗体，保存、备用；步骤四、试剂盒的组建用包被缓冲液将步骤二制备的包被原稀释成0.1 ‑0.5mg/mL，100µL/孔加入酶标板中，4℃过夜或37℃孵育2h‑4h，倾去液体，洗涤液洗涤3 ‑5次，拍干，加入封闭液，37℃孵育2h‑4h，倾去孔中液体，拍干，室温在真空干燥箱干燥5h，铝箔袋真空塑封，得到含有包被原的酶标板；将酶标板放入锡箔纸袋中，真空封装，与乙氧酰胺苯甲酯标准品溶液、标记抗体、乙氧酰胺苯甲酯单克隆抗体液、稀释液、洗涤液一同放入专用的包装盒中，置于4℃保存。