[发明专利]可应用于循环对接移植的部分胰腺去细胞化生物支架、制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种可应用于循环对接移植的部分胰腺去细胞化生物支架、制备方法及其应用，生物支架以胰腺体尾部作为去细胞化灌注的主体，以腹腔干动脉作为灌注入路，以脾静脉主干或门静脉作为灌注出路，经过去细胞化后获得。制备方法包括：1.制备该支架模型所需的部分胰腺，即胰腺体尾部的获取方式及去细胞化灌注的入路和出路的确立；2.去细胞化的具体流程和具体灌注液；3.该生物支架应用于体内循环对接移植的具体方式。本发明所涉及的去细胞化生物支架去除细胞彻底，脉管结构和外基质成分完整保留，更具创新的是该胰腺生物支架具备单一独立的动脉入路和静脉出路，且密闭性良好，具备体内循环对接移植的独特应用价值。

主权项

1.一种可应用于循环对接移植的部分胰腺去细胞化生物支架的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）胰腺体尾部的获取及去细胞化灌注的入路和出路的确立①经胃左动脉插入导管，导管接蠕动泵持续灌注肝素钠溶液，结扎离断肝总动脉和胃左动脉，将全胰腺分为肉眼可明显区分的头部和体尾部两部分；②沿胰腺头部和体尾部的自然分界线仔细将胰腺头部和体尾部分开，并结扎阻断胰腺和脾脏之间的交通血管，注意保护胰腺体尾部包膜的密闭和完整，在汇入门静脉水平离断脾静脉，游离胰腺体尾部周围的疏松结缔组织后获取制备该生物支架的主体结构—胰腺体尾部，整个游离过程在肝素钠溶液的持续灌注下进行以防止胰腺微血管血栓形成；③以腹腔干动脉为该主体结构的去细胞化灌注入路，而以腹腔干动脉为该主体结构的灌注出路； 2）去细胞化① 具体灌注液a. 1×PBS: 即0.1M PBS，氯化钠8 g，氯化钾0.2 g，磷酸氢二钠1.44 g，磷酸二氢钾0.24 g，加800ml去离子水，用lM的HCL或NaOH调pH，定容lL；b. 2×PBS: 即0.2M PBS，氯化钠16 g，氯化钾0 .4 g，磷酸氢二钠2.88 g，磷酸二氢钾0.48 g，加800ml去离子水，用1 M的HCL或NaOH调pH，定容lL；c. 0.02％胰酶/0.05％EDTA溶液：胰酶0.25g，EDTA（乙二胺四乙酸）500mg加100ml0.1M PBS，配制成0.25％胰酶/0.5％EDTA（乙二胺四乙酸）溶液，然后以0 .1M PBS液稀释l0倍；d. 1%Triton-X100/0 .05%EDTA溶液：Triton-X100 10ml，EDTA500mg，加970 ml 0.1 MPBS；e. 0.1％SDS溶液：SDS（十二烷基硫酸钠）1g，加1000 ml 0.1M PBS；f. Dnase I溶液：脱氧核糖核酸酶I,以0.1M PBS为溶剂，配置成浓度为1ug/ml的DnaseI溶液；② 具体去细胞化流程：a.冻融：将离体的胰腺体尾部放置在负80冰箱过夜，第二天自然解冻，完成灌注前的冻融操作；b.灌注流程：室温下，以2ml/min的流速经入路导管依次灌注0.02%胰酶/0.05%EDTA溶液30min、双蒸水15min、2×PBS液15min、1%Triton-X100/0.05%EDTA溶液180min、0.1%SDS溶液30min、Dnase I溶液60min、2×PBS溶液15min、1×PBS溶液5min，完成灌注流程，获得胰腺体尾部去细胞化生物支架；c. 消毒和灭菌：采用γ射线对胰腺体尾部去细胞化生物支架进行辐照灭菌。