[发明专利]痰液中醋酸镰孢氨酸C和双甲硫基胶霉毒素的高效液相色谱-串联质谱同时检测方法

摘要

本发明提供了一种痰液中醋酸镰孢氨酸C(TAFC)和双甲硫基胶霉毒素(bmGT)的高效液相色谱‑串联质谱同时检测方法，步骤如下：(1)标样和试样的制备；(2)采用液相色谱‑串联质谱法对步骤(1)所得各标样和试样进行测定，得到标样和试样谱图，记录各标样和试样谱图中TAFC、bmGT和非那西丁的峰面积；(3)绘制TAFC和bmGT的工作曲线，根据试样谱图中TAFC与非那西丁的峰面积比值、bmGT与非那西丁的峰面积比值和工作曲线计算出试样中TAFC和bmGT的浓度。本发明实现了从痰液中对TAFC和bmGT的同时检测，为TAFC和bmGT的检测提供了新的途径，有利于提高检测效率。

主权项

1.痰液中醋酸镰孢氨酸C和双甲硫基胶霉毒素的高效液相色谱‑串联质谱同时检测方法，其特征在于步骤如下：(1)标样和试样的制备①将醋酸镰孢氨酸C和双甲硫基胶霉毒素用甲醇溶解，并用乙腈稀释得到一系列醋酸镰孢氨酸C和双甲硫基胶霉毒素浓度梯度变化的混合标准液；配制非那西丁溶液作为内标溶液；②取等体积的各混合标准液，向各混合标准液中分别加入等体积的空白痰液样品和等体积的内标溶液，然后混匀得到一系列混合液，分别向各混合液中加入萃取剂萃取2～3次，将萃取同一混合液得到的萃取液合并，在氮气保护下去除萃取剂，得一系列固态物质，将各固态物质分别用乙腈水溶液溶解并定容至同一体积，离心，所得一系列上清液即为标样；③向待测痰液样品中加入内标溶液并混匀，再向所得含内标的痰液样品中加入萃取剂萃取2～3次，合并萃取液并在氮气保护下去除萃取剂，将所得固态物质用乙腈水溶液溶解，然后离心，所得上清液即为试样；(2)标样和试样的测定采用液相色谱‑串联质谱法对步骤(1)所得各标样和试样按照以下色谱条件和质谱条件进行测定，得到标样和试样谱图，记录各标样和试样谱图中醋酸镰孢氨酸C、双甲硫基胶霉毒素和非那西丁的峰面积；色谱条件：采用Agilent Extend C18色谱柱，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，流动相A为0.1wt％～0.15wt％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱条件为：在0min至1min，洗脱液中流动相B的体积百分数为25％、流动相A的体积百分数为75％，在大于1min、小于等于4min，洗脱液中流动相B的体积百分数由25％线性增加至95％、流动相A的体积百分数由75％线性减少至5％，在大于4min，洗脱液中流动相B的体积百分数为95％、流动相A的体积百分数为5％；质谱条件：电喷雾离子化源，正离子模式，多反应监测方式，毛细管电压3500～3550V，干燥气温度350～360℃，干燥气流速5～6L/min，鞘气温度350～360℃，鞘气流速11～12L/min，Delta EMV 300～320V；测定醋酸镰孢氨酸C的母离子的质荷比m/z为928.3，子离子的质荷比m/z为251，碎裂电压为240V，碰撞电压为65V；测定双甲硫基胶霉毒素的母离子的质荷比m/z为357.1，子离子的质荷比m/z为309.1，碎裂电压为76V，碰撞电压为5V；测定非那西丁的质荷比m/z为180.1，子离子的质荷比m/z为138.3，碎裂电压为120V，碰撞电压为15V；(3)检测结果的获取以各标样中醋酸镰孢氨酸C的浓度为横坐标，以各标样谱图中醋酸镰孢氨酸C与非那西丁的峰面积比值为纵坐标，绘制醋酸镰孢氨酸C的工作曲线；以各标样中双甲硫基胶霉毒素的浓度为横坐标，以各标样谱图中双甲硫基胶霉毒素与非那西丁的峰面积比值为纵坐标，绘制双甲硫基胶霉毒素的工作曲线；将试样谱图中醋酸镰孢氨酸C与非那西丁的峰面积比值、双甲硫基胶霉毒素与非那西丁的峰面积比值分别带入醋酸镰孢氨酸C和双甲硫基胶霉毒素的工作曲线的线性回归方程中，计算出试样中醋酸镰孢氨酸C和双甲硫基胶霉毒素的浓度。