[发明专利]LC-MS/MS法同时测定烟草中游离氨基酸和Amadori化合物的方法

摘要

本发明提供了一种LC‑MS/MS法同时测定烟草中游离氨基酸和Amadori化合物的方法，样品用溶剂提取后，用LC‑MS/MS分析定性定量，其中液相色谱柱为Acclaim Explosive E2分析色谱柱，本方法避免了繁琐的衍生化步骤和复杂液相色谱条件的使用，具有前处理简单、灵敏度高、特异性强的特点，且适用于高通量烟草样品中目标化合物的定量分析。

主权项

1.一种LC‑MS/MS法同时测定烟草中游离氨基酸和Amadori化合物的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)工作溶液的配制：标准储备液的配制，称取氨基酸化合物和Amadori化合物标准品，用超纯水配制成混合标准品储备液量备用；称取内标物量，配制内标物混合储备液；标准工作溶液的配制，以超纯水为稀释液，配制成氨基酸化合物和Amadori化合物的系列混合标准溶液；(2)样品前处理：精确称取烟草样品0.1g于50mL离心管中，加入内标物储备液，用溶剂10‑30ml超声萃取10min，取萃取液2mL于8000r/min离心15min后过0.22μm微孔滤膜过滤上机；(3)用LC‑MS/MS分析：液相色谱条件：色谱柱为Acclaim Explosive E2分析色谱柱，250×4.6mm，5μm；流动相流速为400μL/min；柱温为30℃；进样量为2μL；质谱条件：离子源：ESI源；检测方式：正离子检测；扫描方式：MRM；喷雾电压：3200V；鞘气压力35arb；辅助气压力8arb；毛细管温度275℃；气化温度150℃；碰撞室压力1.0mTorr；液相条件中流动相为甲醇A‑0.1％甲酸水溶液B，梯度洗脱程序：0～4.7min，4％A～35％A；4.7～8.7min，35％A～77％A；8.7～13.0min，77％A～100％A；13.1～19.0min，1％A～1％A；所述测定的烟草中游离氨基酸为L‑赖氨酸(Lys)、L‑精氨酸(Arg)、L‑丝氨酸(Ser)、L‑谷氨酰胺(Asn)、L‑丙氨酸(Ala)、L‑谷氨酰胺(Gln)、L‑天冬氨酸(Asp)、L‑酪氨酸(Tyr)、L‑异亮氨酸(Ile)、L‑色氨酸(Trp)；L‑苏氨酸(Thr)、L‑谷氨酸(Glu)、L‑脯氨酸(Pro)、L‑缬氨酸(Val)、L‑亮氨酸(Leu)、L‑苯丙氨酸(Phe)；所述测定的烟草中Amadori化合物为1‑L‑丙氨酸‑1‑脱氧‑D‑果糖(Fru‑Ala)、1‑L‑脯氨酸‑1‑脱氧‑D‑果糖(Fru‑Pro)、1‑L‑缬氨酸‑1‑脱氧‑D‑果糖(Fru‑Val)、1‑L‑亮氨酸‑1‑脱氧‑D‑果糖(Fru‑Leu)、1‑L‑苯丙氨酸‑1‑脱氧‑D‑果糖(Fru‑Phe)、1‑L‑色氨酸‑1‑脱氧‑D‑果糖(Fru‑Trp)。