[发明专利]一种筛选炎性体NLRP3激活剂及抑制剂的荧光细胞传感器

摘要

本发明公开了一种筛选炎性体NLRP3激活剂及抑制剂的荧光细胞传感器，属于药物筛选技术领域。本发明通过转基因手段构建了一种细胞荧光传感器，将NLRP3启动子核心区与ZSGREEN基因插入质粒载体，转入Thp‑1细胞得到稳转细胞系；该稳转细胞系在接受到NLRP3炎性体的刺激后，会发出绿色荧光，采用宽场成像高内涵捕捉荧光细胞。该荧光传感器可以实现两个目的，第一，快速高效的发现可以引起NLRP3高表达的物质，第二，在NLRP3激活剂的作用下，可以快速高效的发现抑制NLRP3激活的物质。并且，宽场成像高内涵可以高通量的拍摄荧光图像，极大的提高了筛药的效率。本发明方法可以用于以NLRP3炎性体为靶点的药物的初筛，也可以用于对NLRP3炎性体的科学研究。

主权项

1.一种筛选炎性小体NLRP3抑制剂的方法，其特征在于，所述方法是在稳转细胞系培养液中加入一定浓度的待测试剂，在宽场成像高内涵下连续拍摄，观察细胞荧光变化；所述稳转细胞系的构建，是将含有NLRP3受体核心启动子区和绿色荧光蛋白基因的质粒进行慢病毒的包装，得到含目的质粒的慢病毒液，然后使用获得的含目的质粒的慢病毒液对Thp-1细胞进行感染，筛选获得稳转细胞系；所述慢病毒的包装主要通过首先将质粒通过脂质体转染的方法转入HEK293T细胞，转染进行48-72h后，收集细胞培养上清液，离心后过滤去沉淀，即为所述含目的质粒的慢病毒液；所述对Thp-1细胞进行感染，具体是：将Thp-1细胞按照2.5×10