[发明专利]植物同化铵盐的无机氮同位素分馏值的测定方法

摘要

本发明公开一种植物同化铵盐的无机氮同位素分馏值的测定方法。将无性系组培苗分别培养在稳定氮同位素值不同的两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基中；待组培苗经过5周培养后，测定上述两种硝酸盐培养下的组培苗叶片的稳定氮同位素值；同样，另取无性系组培苗，将其培养在铵盐分别与两种稳定氮同位素值不同的硝酸盐组成的混合氮源的培养基上；测定两种混合氮源培养下组培苗叶片稳定氮同位素值；计算组培苗利用硝酸盐的份额，据此，再计算出在混合氮源培养下组培苗同化铵盐发生氮同位素分馏后的稳定氮同位素值；最终获取组培苗同化铵盐发生的稳定氮同位素分馏值，也即是待测植物同化铵盐发生的稳定氮同位素分馏值。

主权项

1.一种植物同化铵盐的无机氮同位素分馏值的测定方法，其特征在于：包含以下步骤：第一，通过植物组织培养技术获得同一基因型的无性系组培苗，通过调节培养基的激素比例使组培苗处于增殖阶段，形成无根的无性系组培苗；第二，通过同位素质谱仪测定用于配置植物组织培养的培养基中的硝酸盐的稳定氮同位素比值，筛选出稳定氮同位素值差值大于10‰的两种硝酸盐，其稳定氮同位素值分别为δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂；分别将这两种硝酸盐作为唯一氮源配置培养基；第三，将上述无性系组培苗分别培养在上述稳定氮同位素值不同的两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基中；第四，待组培苗经过5周培养后，分别测定上述两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基培养下的组培苗叶片的稳定氮同位素值，其叶片稳定氮同位素值分别记为δ¹⁵N_N1和δ¹⁵N_N2；第五，选用铵盐配置植物组织培养的培养基，保证其稳定氮同位素值δ¹⁵N_A与δ¹⁵N₀₁或δ¹⁵N₀₂的差值均大于10‰；然后将铵盐分别与上述稳定氮同位素值不同的两种硝酸盐组成混合氮源，配置两种不同的混合氮源培养基；第六，另取无性系组培苗，将其分别培养在上述两种不同的混合氮源培养基上；第七，同样，组培苗经过5周培养后，测定上述两种混合氮源培养下组培苗叶片稳定氮同位素值，铵盐与稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₁的硝酸盐组成的混合氮源培养下的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ¹⁵N_N1mix，铵盐与稳定氮同位素值为δ¹⁵N₀₂的硝酸盐组成的混合氮源培养下的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ¹⁵N_N2mix；第八，利用δ¹⁵N_N1、δ¹⁵N_N2、δ¹⁵N_N1mix和δ¹⁵N_N2mix计算组培苗利用硝酸盐的份额f_b，也即待测植物利用硝酸盐的份额；第九，利用δ¹⁵N_N1、δ¹⁵N_N2、δ¹⁵N_N1mix、δ¹⁵N_N2mix以及组培苗利用硝酸盐的份额f_b，求出在混合氮源培养下组培苗同化铵盐发生氮同位素分馏后的稳定氮同位素值δ¹⁵N_A‑T；第十，依据δ¹⁵N_A‑T和δ¹⁵N_A求出组培苗同化铵盐发生的稳定氮同位素分馏值Δ¹⁵N_A，即待测植物同化铵盐发生的稳定氮同位素分馏值。